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Título: Efeito de peroxinitrito nos resíduos de actina
Autor: Silva, Dorinda
Orientador: Aureliano, M.
Palavras-chave: Actina
Peroxinitrito
Data de Defesa: 2006
Resumo: Sabe-se que várias patologias estão associadas à existência de dano oxidativo nos tecidos. O peroxinitrito (ONOO-) é um dos agentes oxidantes referido em várias patologias, tais como na disfunção ventricular, na carcinogénese e em doenças neurodegenerativas. Para além destes estudos, verificou-se recentemente que a exposição dos filamentos de actina (F-actina) a fluxos submicramolares de peroxinitrito, provoca uma despolimerização destes filamentos com uma consequentemente inibição da estimulação da actividade ATPásica da miosina. No presente trabalho, estudou-se a susceptibilidade da actina, de músculo esquelético de coelho, à exposição crónica in vitro a peroxinitrito, resultante da decomposição do composto SIN-1. O SIN-1 liberta pulsos lentos das espécies oxidantes de superóxido (●O2-) e óxido nítrico (●NO), que reagem entre si resultando em peroxinitrito (ONOO-). O efeito deste agente oxidante na actina foi analisado medindo a capacidade de polimerização da proteína, a nitração dos resíduos de tirosina e a oxidação dos resíduos de cisteína e de metionina. Após exposição ao SIN-1 observou-se, que o peroxinitrito aumenta o tempo de meia vida (t1/2) da polimerização máxima de G-actina com um IC50 de 58,5 ± 10,4 µM SIN-1. Verificou-se oxidação de císteinas de G-actina, sendo a Cys374 a mais susceptível ao ONOO- (IC50 = 10,9 ± 2,5 µM SIN-1). Identificou-se ainda uma possível oxidação das metioninas nas posições 44 e 47 com valores de IC50 de 58,7 ± 19,2 μM e 30,8 ± 8,8 μM de SIN-1, respectivamente. Não se detectou, no entanto, formação de 3-nitrotirosinas. Apesar da oxidação da Cys374 preceder a oxidação da Met44 e da Met47, os valores de IC50 semelhantes encontrados para a inibição da polimerização da G-actina e para oxidação das metioninas, sugerem que estes resíduos apresentam um papel relevante na oxidação induzida pelo peroxinitrito na actina.
It’s known that oxidative stress is associated in diverse diseases. Peroxynitrite is one of these oxidant agents that is described in some diseases, like ventricular dysfunction, carcinogenesis and neurodegenerative diseases. Furthermore, was been recently shown that an exposure to submicromolar fluxes of ONOO-, produces an extensive depolymerization of the actin filaments (F-actin) leading to an almost complete blockade of myosin ATPase activity stimulation. In this work, it was studied the susceptibility of actin from rabbit skeletal muscle to in vitro cronic exposure to peroxynitrite, resulting of the SIN-1 compound decomposition reaction. SIN-1 releases slow pulses of the oxidant species superoxide (●O2-) and nitric oxide (●NO), which react one each other to produce peroxynitrite (ONOO-). The effect of this oxidant agent on actin was determined measuring the ability of G-actin polymerization, the tyrosine residues nitration and the cystein and methionine oxidation. After exposure to SIN-1 it was observed that the half-time of maximum polymerization of G-actin is increased with an IC50 value of 58,5 ± 10,4 µM SIN-1. It was verified the G-actin cystein oxidation, being Cys 374 the most susceptible to ONOO- (10,9 ± 2,5 µM SIN-1). It was identified a possible oxidation of methionine 44 and 47 with IC50 values of 58,7 ± 19,2 μM and 30,8 ± 8,8 μM SIN-1, respectively. There was no production of 3-nitrotyrosines. Although the oxidation of Cys-374 precedes that of Met-44 and Met-47, the close IC50 values obtained for the inhibition of G-actin polymerization and methionines oxidation suggests that these residues may play a relevant role in the functional impaiment of peroxynitrite-induced actin oxidation.
Descrição: Relatório de estágio de licenciatura, Bioquímica, Faculdade de Ciências e Tecnologia da Universidade do Algarve, 2006
Peer review: yes
URI: http://hdl.handle.net/10400.1/4914
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