Andrade, RaquelAraújo, InêsMilitão, Inês Torradinhas2025-07-282025-07-282024-11-12http://hdl.handle.net/10400.1/27502Brachyury é um fator de transcrição responsável pelos movimentos morfogénicos durante o processo embriológico da gastrulação para formar as camadas germinativas mesoderme e endoderme. Participa ainda na manutenção de características estaminais das células no botão caudal, garantindo a elongação do eixo anteroposterior do embrião. No adulto, a expressão de Brachyury é diminuta na maioria dos tecidos provenientes da mesoderme, endoderme e ectoderme não-neural. No tecido cerebral adulto, no entanto, é possível detetar expressão de Brachyury. Experiências prévias no laboratório mostraram que Brachyury participa da diferenciação neural, e a diminuição da sua expressão está associada a Gliomas, o tumor mais agressivo do cérebro. Neste trabalho procurou-se compreender quando e onde é expresso Brachyury ao longo do desenvolvimento do sistema nervoso central e qual é a sua função. Através da técnica de hibridação in situ aplicada a embriões de galinha em diversos estadios de desenvolvimento, observou-se que Brachyury é primeiramente expresso nas células da crista neural cranial no estadio HH13 e que, mais tarde, é expresso nas regiões dorsais do telencéfalo e diencéfalo, assim como na região do istmo. Brachyury co-localiza com os genes Pax6 e Wnt8b nestas estruturas. Com recurso à técnica de eletroporação in ovo, foi feita a sobre-expressão de Brachyury e observou-se que não alterou a expressão do gene Wnt8b no cérebro em desenvolvimento. Neste trabalho, foi também iniciada a otimização da técnica de imunohistoquímica in toto, para localização da proteína Brachyury, bem como da técnica de RT-qPCR de forma a genotipar embriões de murganho provenientes do cruzamento de mutantes T+/-, para estudos futuros. É necessário continuar o processo de otimização, focando no desenho de novos primers, os Intron-spanning primers.Brachyury is a transcription factor responsible for morphogenetic movements during the embryological process of gastrulation, forming the mesoderm and endoderm germ layers. It also participates in maintaining stem cell characteristics in the tail bud, ensuring the elongation of the anteroposterior axis of the embryo. In adults, the expression of Brachyury is low in most tissues derived from the mesoderm, endoderm, and non-neural ectoderm. However, in adult brain tissue, Brachyury expression can be detected. Previous experiments in the laboratory have shown that Brachyury is involved in neural differentiation, and the decrease in its expression is associated with gliomas, the most aggressive brain tumor. This study aimed to understand when and where Brachyury is expressed throughout the development of the central nervous system and what is it’s function. Using the in situ hybridization technique applied to chicken embryos at various developmental stages, it was observed that Brachyury is first expressed in the cranial neural crest cells at stage HH13, and later is expressed in the dorsal regions of the telencephalon and diencephalon, as well as in the isthmus region. Brachyury co-localizes with the genes Pax6 and Wnt8b in these structures. Using the in ovo electroporation technique, Brachyury overexpression was performed, and it was observed that it did not alter the expression of the Wnt8b gene in the developing brain. This study also initiated the optimization of the in toto immunohistochemistry technique for locating Brachyury protein, as well as the RT-qPCR technique to genotype embryos from T+/- mutant crosses for future studies. It is necessary to continue the optimization process, focusing on designing new primers, the intron-spanning primers.porBrachyurySistema nervoso centralGallus gallusEmbriãomaster thesis203911938