Browsing by Author "Mestizo, Ma Llorina"
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- Analysis of paralytic shellfish toxins in natural samples: liquid chromatography coupled to fluorescent detection versus liquid chromatography coupled to mass spectrometryPublication . Mestizo, Ma Llorina; Silva, José Paulo da; Lage, SandraAs toxinas PSP (Paralytic Shellfish Poison), conhecidas pelos seus efeitos paralisantes, são produzidas por várias espécies de dinoflagelados marinhos e subsequentemente bioacumulam-se em bivalves filtradores. Estes bivalves tornam-se vetores para o consumo humano, podendo causar sintomas tóxicos como dormência, diarreia, náuseas e vómitos, e, em casos graves, levar à morte por paralisia respiratória. Estas toxinas são monitorizadas por diversos países para proteger a saúde pública. No entanto, algumas toxinas PSP não são monitorizadas nem regulamentadas, pois foram recentemente descobertas através de técnicas analíticas avançadas. Neste estudo, comparamos o método AOAC de cromatografia líquida com deteção por fluorescência com o método desenvolvido no nosso laboratório, que utiliza cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massa de alta resolução (LC-HRMS), seguida de extração de cromatogramas da massa exata (AMXIC) para quantificar as toxinas PSP regulamentadas e não regulamentadas. O procedimento AMXIC demonstrou ser seletivo, fornecendo perfis individuais claros tanto para toxinas regulamentadas quanto para não regulamentadas. Devido à indisponibilidade de CRMs (Certified Reference Materials) para esses análogos, foi realizada uma estimativa usando o procedimento AMXIC e a resposta ao análogo de toxina regulamentada mais semelhante. Analisaram-se extratos de amostras de mexilhão naturalmente contaminadas (Mytilus galloprovincialis) e do dinoflagelado marinho Gymnodinium catenatum utilizando os métodos mencionados. Além disso, os efeitos de matriz foram avaliados em extratos preparados com cartuchos de C18 e de carbono grafitizado, utilizando saxitoxina como composto de referência. As toxinas PSP não regulamentadas com um grupo hidroxilo no C-11, conhecidas como toxinas M, foram detetadas na amostra de mexilhão contaminado, enquanto as toxinas GC foram observadas apenas na amostra de dinoflagelado. A identificação foi feita com base nas massas exatas e nos padrões de fragmentação. No entanto, nem todas as toxinas não regulamentadas presentes nas amostras foram identificadas devido à baixa intensidade dos sinais destes analitos após fragmentação. A falta de CRMs para essas toxinas não regulamentadas limita a sua identificação. Em conclusão, o método HPLC-FLD é eficaz para triagem, especialmente em análises de rotina. No entanto, o método LC-HRMS permite uma identificação mais precisa do perfil completo das toxinas PSP nas amostras, contribuindo para uma melhor avaliação da toxicidade total.