Percorrer por autor "Rato, Carla Cristina Pereira Salgueiro Catarino"
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- Optimisation of an aptamer-biosensor to detect C-reactive proteinPublication . Rato, Carla Cristina Pereira Salgueiro Catarino; Ferreira, Guilherme; Turner, A.P.F.; Mascini, M.A proteína C reactiva (PCR) é um biomarcador de doenças caracterizadas por uma resposta inflamatória aguda; tais como: doenças coronárias, diabetes mellitus ou carcinomas. A detecção desta proteína em fluidos corporais, em especial em soro humano pode ainda determinar risco de desenvolvimento futuro de doenças coronárias em indivíduos aparentemente saudáveis. Foi realizado a optimização de um novo biosensor aplicando a técnica de Voltametria de Pulso Diferencial (DPV). A detecção foi realizada em solução tampão aquosa utilizando eléctrodos de carbono e o produto enzimático electroactivo da reacção de 1- naftil fosfato com alcalina fosfatase. Neste trabalho foi optimizado, em solução tampão, o tempo de incubação e o valor de concentração da alcalina fosfatase conjugada com streptavidina. As condições finais foram testadas em solução de soro humano livre de PCR diluído 1:10. A proteína C-reactiva foi retirada do meio líquido aplicando a técnica de ensaio imunológica “sandwich”. O ensaio requereu como suporte sólido esferas magnéticas cobertas por streptavidina e como captores biológicos um aptamero de RNA e um anticorpo monoclonal, ambos biotinilados. O tempo optimizado de incubação foi de 10 min e a concentração óptima de fosfatase alcalina acoplada a streptavidina foi de 0.22U/ml. Estas condições em meio tampão demonstraram um limite de detecção de pelo menos 0.1mg/l de PCR com um coeficiente de variação igual a ±14.45%. Para as mesmas condições, mas em soro humano livre de PCR, o limite de detecção foi de pelo menos 0.5mg/l de concentração proteica e o coeficiente de variância de ±7.32%. O biosensor desenvolvido demonstrou elevada exactidão, reprodutibilidade, relativa sensibilidade e rápida concretização do ensaio quando comparado com outros métodos de detecção tradicionais. Deste modo o novo biosensor desenvolvido apresenta-se como um excelente candidato à detecção da PCR no campo do diagnóstico médico.