Repository logo

FCB1-Teses

Permanent URI for this collection

http://hdl.handle.net/10400.1/9942

Browse

Browsing FCB1-Teses by Author "Ablyazizov, Seyar"

Now showing 1 - 1 of 1
  • Estudo da função das proteínas MOB1 e ASPM na progressão da mitose
    Publication . Ablyazizov, Seyar; Tavares, Álvaro
    Os genes da família MOB (Mps One Binder) são muito conservados entre as espécies. A quantidade de genes MOBs aumenta com a complexidade dos organismos. Por exemplo, em levaduras há dois tipos de MOB enquanto em humanos há sete MOBs diferentes. Neste estudo focamos no gene MOB1. O MOB1 é o supressor tumoral que tem duas proteínas distintas MOB1A e MOB1B com homologia de 95%. O MOB1 faz parte da via Hippo que é a reguladora do crescimento dos órgãos. Além disso, o MOB1 faz parte da via MEN (Mitotic Exit Network) que força as células sair da mitose e promove a correta divisão celular (citocinese). Todos os trabalhos feitos à volta do MOB1 consideram MOB1A e MOB1B como as proteínas com funções idênticas. Os trabalhos do nosso laboratório, por RNAi, mostram que MOB1A e MOB1B têm algumas funções em comum e outras funções especificas de cada um deles. Para aprofundar os estudos e dada a penetrância incompleta dos ensaios por RNAi, torna-se necessário obter linhas celulares sem os genes de MOB1A e/ou MOB1B (clones nulos). Neste trabalho foi usada a tecnologia CRISPR/Cas9 com a inserção da sequência de interesse (HDR) pela recombinação homologa para criar os clones nulos do MOB1. Foram identificados clones nulos (desativação dos dois alelos) e heteroalelicos (desativação de um alelo) dos MOB1A e MOB1B com abordagem por PCR. A análise das linhas nulas permitiu observar diferentes fenótipos para MOB1A e MOB1B. A imunofluorescência realizada nos clones nulos e heteroalelicos permitiu identificar as pontes de cromatina entre as células e identificar células gigantes. Estas observações confirmam divisões incompletas e má segregação cromossómica. Além disso, foram confirmados os resultados obtidos do trabalho anterior das células tratadas com RNAi para MOB1A e/ou MOB1B. Em conclusão, este trabalho permitiu descobrir as possíveis funções dos MOB1A e MOB1B que regulam os checkpoints do ciclo celular, que afetam a estabilidade do fuso mitótico e progressão da citocinese.
    2018-05-25Master thesis Open access Show more