Browsing by Author "Bernardo, Marta Sofia Mendes Valente"
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- Comparação dos métodos aplicados na detecção de bactérias coliformes, Escherichia coli e Enterococcus sp. em águas para fins recreativosPublication . Bernardo, Marta Sofia Mendes Valente; Dionísio, LídiaA avaliação da qualidade microbiológica de águas para fins recreativos constitui uma actividade de grande importância, dado que é necessário garantir que a utilização deste tipo de águas seja feita sem colocar em risco a saúde humana. A monitorização do estado sanitário das águas no que respeita à contaminação fecal é feita, pela enumeração dos microrganismos indicadores Escherichia coli e enterococos através de métodos normalizados. O facto destes métodos não disponibilizarem os resultados em tempo útil, conduziu ao desenvolvimento de métodos mais rápidos e sensíveis para a enumeração dos microrganismos indicadores. A tecnologia de substrato definido desenvolvida pela empresa IDEXX Laboratories, Inc., permite reduzir o tempo de manipulação e de incubação das amostras, assim como o tempo de leitura dos resultados. Com o objectivo de estudar a relação entre os dois métodos aplicados para a enumeração de bactérias coliformes e enterococos, foram analisadas amostras de águas, para fins recreativos, através do método de referência de filtração por membrana e em paralelo através dos testes enzimáticos Colilert® e Enterolert®. O teste Colilert® revelou resultados equivalentes aos obtidos pelo método de referência, ao contrário do teste Enterolert® que demonstrou ser estatisticamente diferente do método normalizado. Tomando também em consideração os resultados observados por outros autores conclui-se que, deverão ser analisadas mais amostras. E que a confirmação de uma maior percentagem de presumíveis positivos é essencial, para se conseguir uma maior aproximação do número real de bactérias a enumerar através de ambos os métodos, e assim se poder estabelecer a sua equivalência.
- Simple and rapid RNA extraction from freeze-dried tissue of brown algae and seagrassesPublication . Pearson, G. A.; Lago-Lestón, Asunción; Serrão, Ester; Bernardo, Marta Sofia Mendes ValenteAn inexpensive and rapid RNA extraction protocol for brown algae and seagrasses is presented, based on homogenization in a simple CTAB buffer and selective precipitation of RNA with lithium chloride. The protocol avoids the use of toxic chaotropic agents and phenol; high concentrations of dithiothreitol are used to inhibit RNase activity and to prevent oxidative cross-linking of nucleic acids by phenolics. A relatively high throughput of about 100 samples in 24 h can be achieved for, for example, Northern analysis. Yields of 50–200 µg g−1 fresh weight are comparable with those obtained for higher plants using commercially available kits. Tests of the extraction procedure demonstrate that high quality, intact RNA can be obtained from a variety of lyophilized brown algal tissues, even after prolonged storage at room temperature. Lyophilization is therefore suggested as an alternative to freezing tissue at −70°C to −80°C. The RNA obtained was used directly in several downstream applications to detect Fucus plastid-encoded transcripts by RNA-labelling, RT-PCR and Northern analysis.