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- The spindle assembly checkpoint: new insights into its function, regulation and therapeutic implicationsPublication . Silva, Patrícia Manuela Areias da; Tavares, Álvaro Augusto Marques; Bousbaa, HassanGenomic stability relies on the faithful chromosome segregation in mitosis, under the control of the Spindle Assembly Checkpoint (SAC). This surveillance mechanism monitors the nature of kinetochore-microtubule attachments (KT-MT) and prevents premature anaphase onset until all chromosomes achieve proper bipolar attachments and come under tension. To initiate anaphase and promote mitotic exit, the silencing of SAC is required. In this study, we proposed to shed light into the function and regulation of the SAC mechanism and to explore its potential as therapeutic target for cancer therapy. For that, two questions were asked that define the main objectives of the present thesis: i) how SAC proteins are functionally related to motor proteins to regulate KT-MT attachments and SAC silencing? and ii) to what extent could SAC proteins constitute relevant cancer biomarkers and/or relevant targets to kill cancer cells, either alone or in combination with currently used antimitotics? We found that RNAi-mediated co-depletion of the SAC protein Bub3 and the motor protein dynein partially restored functional KT-MT attachment, otherwise severely affect by individual depletion of each of the two proteins, leading to chromosome congression. An antagonistic relationship between Bub3 and dynein is suggested to ensure stable KT-MT attachments. In addition, we demonstrated that upon chromosome alignment at the metaphase plate, the core SAC proteins Mad1, Mad2, Bub1, BubR1, and Bub3 and the KMN components Hec1 and Mis12 are poleward transported by dynein, suggesting a role in SAC silencing. Second, and in a therapeutic perspective, we dissected the dual role of Spindly (kinetochore regulator of dynein), in chromosome attachment and SAC silencing, as a strategy to potentiate tumor cell killing. We found an upregulation of Spindly in human cancer cell lines and in patient samples which are correlated with tumor proliferation. Interestingly, Spindly inhibition enhanced the cytotoxic response of paclitaxel- and cisplatin-mediated chemotherapy, and sensitized human tumor cells to death. Overall, we provide new insight into the regulation of kinetochore-microtubule interactions by establishing a functional antagonistic relationship between Bub3 and dynein in regulating KT-MT attachment. Also, we provide new insight as to SAC components that are removed from the kinetochore by dynein during SAC silencing.
- Aplicação em tempo-real para deteção automática de fraturas ósseas em imagens de ultrassomPublication . Dias, João Pedro Teixeira; Ruano, M. Graça; Daniel, Helder Aniceto Amadeu de SousaA população mundial está atualmente exposta a um nível de radiação considerável. Não se refere apenas à radiação solar, que só por si é bastante preocupante, mas também à radiação proveniente de outras fontes, nomeadamente as relacionadas com métodos imagiológicos que utilizam radiação ionizante. A utilização de raios-X, é uma prática bastante comum nos métodos de diagnóstico e a sua frequência de utilização é alarmante quando os pacientes são ainda jovens ou crianças por o seu organismo ainda se encontrar em crescimento e ser potencialmente afetado pelas radiações. A utilização de métodos imagiológicos baseados em ultrassom, devem ser levados em consideração nestes casos, por serem métodos com radiação não-ionizante. Apesar de estes métodos necessitarem de maior experiência por parte do técnico, a instrumentação é de menor dimensão, são mais económicos e mais portáveis. No sentido de promover a utilização de métodos imagiológicos alternativos, este projeto de dissertação deu seguimento a projetos anteriormente desenvolvidos pelo Nuno Fernandes e pelo Luís Nascimento, de forma a facilitar a utilização da imagiologia ultrassónica de diagnóstico mediante a criação de uma aplicação em tempo-real para deteção de fraturas ósseas em imagens de ultrassom. As imagens de ultrassom são caracterizadas pela presença de ruído aleatório causado por reflexões microscópicas que ocorrem nas diversas estruturas internas do paciente. O ruído Speckle, é caracterizado por apresentar um efeito de pequenos salpicos, em vários tons de cinza ao longo de toda a imagem. Para reduzir o problema gerado pela presença deste tipo de ruído, são utilizados dois filtros intitulados como Mean Filter e SSR (Simple Speckle Removal). No que diz respeito à identificação da linha de osso na imagem ultrassonográfica, os métodos leftright, middle ou 3split+middle apresentaram bons resultados, segundo a literatura, e posteriormente, através de uma soma de intensidade de pixéis na região da linha de osso identificada, é possível encontrar a fratura óssea. Tendo presente esta informação, o primeiro objetivo foi pesquisar se estaria disponível algum aplicativo móvel que permitisse a identificação de fraturas ósseas em imagens de ultrassom. Após pesquisa, verificou-se que apenas estão disponíveis aplicativos de caracter educacional. Aplicativos que exemplificam o modo de se obter as imagens, ao mostrar a posição e a zona onde a sonda deverá ser ocupada e sugestões de possíveis patologias encontradas nessas regiões. Para além destes, apenas existe um aplicativo que permite a identificação de fraturas ósseas ao utilizar este tipo de imagens e foi o aplicativo desenvolvido pelo Luís Nascimento. Foi definido como segundo objetivo a ligação do algoritmo desenvolvido em MATLAB, com o aplicativo móvel que se iria desenvolver. Este objetivo foi conseguido com a utilização de um pacote que após instalação, torna possível a comunicação entre a linguagem Python, JAVA ou C++, e o engine do MATLAB. Este pacote, o MATLAB engine para Pyhton, permite a utilização de funções previamente desenvolvidas em MATLAB, numa aplicação desenvolvida em Python. O terceiro e último objetivo definido, foi criar a aplicação que conseguisse gerar a resposta no mesmo formato da aplicação desenvolvida pelo Luís Nascimento e aproximadamente no mesmo espaço temporal. Tratando-se de um aplicativo em tempo-real, o tempo de resposta era fulcral para o sucesso deste aplicativo. Era necessário ter alguns fatores em consideração, tais como, o tempo de resposta da aplicação em MATLAB e o tempo da comunicação entre servidor e cliente. O objetivo inicialmente delineado foi conseguido apenas na segunda versão do aplicativo, em que se colocou a inicialização do MATLAB engine no momento em que o servidor era inicializado, evitando esta perda de tempo no momento em que utilizador submeteria a imagem para ser analisada pelo aplicativo. Tendo como comparação um teste preliminar feito à aplicação do Luís, verificou-se que os resultados, no que diz respeito ao tempo de resposta da nova aplicação, são bastante satisfatórios. Pelo que se considera que a aplicação em tempo-real desenvolvido apresentou uma boa performance.
- Rede de voluntariado sambrasense em açãoPublication . Cruz, Ariana Patrícia Brito da; Vilhena, Carla CardosoNeste trabalho apresenta-se o relatório do estágio desenvolvido no âmbito do Mestrado de Educação Social da Universidade do Algarve. O estágio realizou-se na Junta de Freguesia de São Brás de Alportel, tendo como principal objetivo a dinamização da Rede de Voluntariado Sambrasense. Num primeiro momento foi realizado um diagnóstico de necessidades a partir do qual foram planeadas as atividades realizada ao longo do estágio. A realização destas atividades permitiu dinamizar a rede e atingir os objetivos pretendidos. Neste relatório é ainda descrito um conjunto de atividades complementares que, embora não correspondendo exatamente ao objetivo do estágio, foram realizadas por mim.