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Faculdade de Medicina e Ciências Biomédicas

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http://hdl.handle.net/10400.1/9941

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Browsing Faculdade de Medicina e Ciências Biomédicas by Field of Science and Technology (FOS) "Ciências Médicas"

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  • Modo de acção de chaperones na montagem do proteassoma 20S de Saccharomyces cerevisiae
    Publication . Tiago, Maria Margarida A. V. Neto; Ramos, Paula
    A degradação selectiva e controlada de proteínas celulares é essencial na manutenção da homeostasia celular. Este processo é mediado pelo sistema Ub/proteassoma, no qual o proteassoma 26S assume uma grande relevância. Este complexo é composto por duas partículas reguladoras 19S e um complexo catalítico, o proteassoma 20S. Embora a estrutura deste ultimo seja conhecida, muitos aspectos da via de montagem continuam por esclarecer, nomeadamente o envolvimento de chaperones específicos e intramoleculares. Neste trabalho pretendeu-se clarificar alguns aspectos acerca do modo de acção dos chaperones específicos Ump1 e Poc1-Poc2, bem como da participação do propeptídeo da subunidade catalítica β2 como chaperone intramolecular no processo de montagem do proteassoma 20S de Saccharomyces cerevisiae, utilizando uma combinação de técnicas moleculares e bioquímicas, juntamente com ensaios de interacção in vitro. De acordo com os resultados, a perda do propeptídeo de β2 é prejudicial para a célula, porém quando a subunidade matura é sobrexpressa a 30 º C, as células recuperam quase na totalidade o fenótipo wild type. Embora a forma matura de β2 presente no complexo 20S não interaja com Ump1, verificou-se que a forma não processada presente no complexo 15S tem a capacidade de interagir com este chaperone. Adicionalmente, tentaram caracterizar-se os complexos precursores 15S formados, na ausência de Ump1. Os dados obtidos mostram a presença de intermediários 15S com alta instabilidade quando sujeitos a electroforese em condições nativas. Relativamente a Poc1-Poc2, os resultados sugeriram que este chaperone se encontra enclausurado no interior do complexo 20S recém-formado, sendo degradado como substrato do proteassoma 20S após a maturação dos locais activos. Com este trabalho foram obtidas novas evidências no sentido de uma melhor compreensão da montagem do proteassoma 20S assistida por chaperones.
    2011Master thesis Restricted access Show more