Modo de acção de chaperones na montagem do proteassoma 20S de Saccharomyces cerevisiae

Tiago, Maria Margarida A. V. Neto

http://hdl.handle.net/10400.1/10580

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Authors

Tiago, Maria Margarida A. V. Neto

Advisor(s)

Ramos, Paula

Abstract(s)

A degradação selectiva e controlada de proteínas celulares é essencial na manutenção da homeostasia celular. Este processo é mediado pelo sistema Ub/proteassoma, no qual o proteassoma 26S assume uma grande relevância. Este complexo é composto por duas partículas reguladoras 19S e um complexo catalítico, o proteassoma 20S. Embora a estrutura deste ultimo seja conhecida, muitos aspectos da via de montagem continuam por esclarecer, nomeadamente o envolvimento de chaperones específicos e intramoleculares. Neste trabalho pretendeu-se clarificar alguns aspectos acerca do modo de acção dos chaperones específicos Ump1 e Poc1-Poc2, bem como da participação do propeptídeo da subunidade catalítica β2 como chaperone intramolecular no processo de montagem do proteassoma 20S de Saccharomyces cerevisiae, utilizando uma combinação de técnicas moleculares e bioquímicas, juntamente com ensaios de interacção in vitro. De acordo com os resultados, a perda do propeptídeo de β2 é prejudicial para a célula, porém quando a subunidade matura é sobrexpressa a 30 º C, as células recuperam quase na totalidade o fenótipo wild type. Embora a forma matura de β2 presente no complexo 20S não interaja com Ump1, verificou-se que a forma não processada presente no complexo 15S tem a capacidade de interagir com este chaperone. Adicionalmente, tentaram caracterizar-se os complexos precursores 15S formados, na ausência de Ump1. Os dados obtidos mostram a presença de intermediários 15S com alta instabilidade quando sujeitos a electroforese em condições nativas. Relativamente a Poc1-Poc2, os resultados sugeriram que este chaperone se encontra enclausurado no interior do complexo 20S recém-formado, sendo degradado como substrato do proteassoma 20S após a maturação dos locais activos. Com este trabalho foram obtidas novas evidências no sentido de uma melhor compreensão da montagem do proteassoma 20S assistida por chaperones.