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Análise molecular e celular da resposta regenerativa da pele/escamas da dourada (Sparus aurata)
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Authors
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Abstract(s)
Em peixes os mecanismos por detrás da regulação da pele e escamas face a alterações
na homeostasia do cálcio estão pouco estudados. Esta tese pretende contribuir para a
identificação dos transcriptos presentes na pele de peixe e a forma como eles alteram em
resposta a uma modificação, através da remoção de uma grande percentagem de
escamas; identificar as células características da escama utilizando de marcadores
moleculares e avaliar as consequências morfológicas de remoção de escamas e a sua
regeneração durante 3 e 7 dias em relação ao controlo. O organismo usado para este
estudo foi a dourada (Sparus auratus), recentemente escolhido como um modelo para
espécies aquícolas e para as quais existem numerosos recursos moleculares.
A pele removida foi utilizada para extracção de RNA e análise histológica. O RNA total
de pele/escama foi hibridado com um oligo-array de dourada, de forma a identificar
diferenças de expressão entre genes dos grupo controlo e tratados. Da técnica de
microarray obtiveram-se resultados reprodutíveis e os dados foram analisados
estatisticamente, utilizando o programa SAM (Significance Analysis of Microarrays).
No grupo de peixes 3 dias após a remoção de escamas um total de 247 sondas estavam
diferencialmente expressas em relação ao controlo do dia 3, dessas 82 estão upreguladas
e as restantes down-reguladas. Por outro lado, no grupo dos 7 dias após a
remoção de escamas apenas 14 sondas tinham uma expressão diferencial.
Para associar as alterações no transcriptoma com morfologia pele, foram realizados
ensaios histoquímicos.
Através da utilização de um marcador enzimático (TRAP) foi possível verificar a
existência de osteoblastos nos tecidos controlo e tratado, mas não foram observadas
mudanças significativas. Em relação à OSN foi realizada imunohistoquímica onde só
foi detectado sinal no tecido controlo, com os marcadores pCNA e ASPIC foi detectado
um aumento do sinal no tecido controlo para o tratado e para os tempos de amostragem.
Description
Dissertação mest., Engenharia Biológica, Universidade do Algarve, 2009
Keywords
Teses Peixes Sparus aurata Dourada Escamas Histologia