Estudo do papel de genes interagindo funcionalmente/fisicamente com Cited2 na biologia das células estaminais embrionárias

M., Trindade

http://hdl.handle.net/10400.1/3782

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Dissertação de Mestrado da Marlene Trindade.pdf		1.18 MB	Adobe PDF	Download

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Authors

M., Trindade

Advisor(s)

Bragança, José Eduardo Marques

Abstract(s)

As células estaminais embrionárias são caracterizadas por possuírem a capacidade de se auto-renovarem indefinidamente em cultura e por possuírem a capacidade de se diferenciarem em qualquer tecido ou célula de um organismo adulto (pluripotência). As funções das células estaminais embrionárias são controladas por factores extrínsecos e intrínsecos, sendo os factores de transcrição Nanog, Oct4 e Sox2 proteínas chaves para manter a pluripotência. No entanto, existem factores de transcrição auxiliares que também participam na regulação destes e de outros genes importantes para a pluripotência, tais como Zic3, Smad2/3, Tbx3, Klf4 por exemplo. Cited2 é um factor de transcrição importante para múltiplos processos do desenvolvimento embrionário de ratinho, cuja sobrexpressão é capaz de manter as células estaminais de ratinho com características de pluripotência na ausência do factor inibitório da leucemia (LIF) necessário para impedir a diferenciação das células estaminais embrionárias de ratinho em cultura. Neste trabalho experimental os principais objectivos foram verificar o efeito do factor Cited2 no controlo da actividade do promotor de Nanog em conjunto com outros factores de transcrição e determinar a influência da sobrexpressão de Cited2 no estado de metilação da lisina 4 da histona H3 (H3K4) nos promotores dos genes Nanog, Oct4 e Tbx3. Os nossos estudos revelaram que o Cited2 possui interacções com vários domínios do promotor de Nanog. Observou-se também que o Cited2 não altera significativamente o estado de metilação H3K4 dos promotores de Nanog e Oct4, contudo parece estar a influenciar negativamente o estado de metilação de Tbx3. Verificou-se ainda que a sobrexpressão de Cited2 provoca um aumento da actividade do promotor de Nanog, em aproximadamente duas vezes. Nas nossas condições, também observamos um efeito cooperativo modesto mas significativo entre Smad2, Zic3 e Cited2 para activar o promotor de Nanog, enquanto a sobrexpressão de Nanog e p53 em presença ou ausência de Cited2 reduzem a actividade deste promotor.