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O efeito da Varfarina no desenvolvimento esquelético de larvas de peixe zebra (Danio rerio)
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A carboxilase dependente da vitamina K (VKD), permite que ocorra uma transformação dos resíduos de ácido glutamico (Glu) para ácido carboxiglutamico (Gla), que torna funcionais as proteínas dependentes da vitamina K (VKD), influenciando a fisiologia, a homeostasia, a apoptose, a transducção do sinal, o controlo do crescimento, a calcificação arterial e o desenvolvimento do esquelto. A proteina Gla da matriz (Mgp) e a osteocalcina (Oc ou proteína Gla do osso- Bgp), têm a capacidade de ligar o cálcio através do dominio contendo os resíduos gla, sendo uma função essencial para a sua actividade biológica como inibidor de calcificação (Mgp) e modulador dos cristais de hidroxiapatite (Oc). Usaram-se fases larvares de peixe zebra (Danio rerío), para compreender o efeito da varfarina no desenvolvimento esquelético. A varfarina é um conhecido anticoagulante, que inibe a acção da carboxilação da vitamina K (VKGC), inibindo a maturação da Oc e da Mgp e levando a um incorrecto resultado da sua função. Para avaliar os efeitos varfarina, recorreu-se à dupla coloração do esqueleto com azul de alcian e vermelho de alizarin, revelando uma inibição da mineralização. A imunodetecção da Oc e da Mgp revelaram uma acumulação acrescida em tecidos calcificados em desenvolvimento. A quantificação da expressão por PCR em tempo real revelou uma sobre-expressão de mgp e oc por resposta ao tratamento com varfarina. A varfarina aparenta afectar a correcta calcificação das larvas e na função da Oc e Mgp.
The Vitamin K-dependent (VKD) carboxylase allows the conversation of the glutamyl residues (Glu) to carbolxy glutamic acid (Gla), having an effect on the vitamin K dependente (VKD) proteins, and this go influence the physiology of the homeostasis, apoptosis, signal transduction, growth control, arterial calcification and skeletal development. Matrix Gla protein (MGP) and osteocalcin (Oc or bone Gla Protein- BGP) have the capacity to bind calcium trough the gla domain, something essential for biological activity as inhibitor of calcification (Mgp) and modulator of hydroxyapatite crystals. We used developing larvae of zebrafish (Danio rerío) to evaluate the effects of warfarin in skeletal development. Warfarin is a known anticoagulant, that inhibits the action of vitamin K carboxylation (VKGC), inhibiting the maturation of oc and mgp taking to an incorrect result of their function. For accessing the effects of warfarin we used whole mount double staining with Alcian Blue and Alizarin red revealing a decrease im mineralization. The imunodetection of Oc and Mgp showed an increased accumulation in calcified tissues and quantitative real time PCR showed a upregulation of both oc and mgp as response to warfarin treatment. Warfarin appears to affect the correct calcification in larvae and affect the function of Oc and Mgp.
The Vitamin K-dependent (VKD) carboxylase allows the conversation of the glutamyl residues (Glu) to carbolxy glutamic acid (Gla), having an effect on the vitamin K dependente (VKD) proteins, and this go influence the physiology of the homeostasis, apoptosis, signal transduction, growth control, arterial calcification and skeletal development. Matrix Gla protein (MGP) and osteocalcin (Oc or bone Gla Protein- BGP) have the capacity to bind calcium trough the gla domain, something essential for biological activity as inhibitor of calcification (Mgp) and modulator of hydroxyapatite crystals. We used developing larvae of zebrafish (Danio rerío) to evaluate the effects of warfarin in skeletal development. Warfarin is a known anticoagulant, that inhibits the action of vitamin K carboxylation (VKGC), inhibiting the maturation of oc and mgp taking to an incorrect result of their function. For accessing the effects of warfarin we used whole mount double staining with Alcian Blue and Alizarin red revealing a decrease im mineralization. The imunodetection of Oc and Mgp showed an increased accumulation in calcified tissues and quantitative real time PCR showed a upregulation of both oc and mgp as response to warfarin treatment. Warfarin appears to affect the correct calcification in larvae and affect the function of Oc and Mgp.