Publication
Unveiling a potential role for CITED2 in Glioblastoma Biology
| datacite.subject.fos | Ciências Médicas::Outras Ciências Médicas | |
| dc.contributor.advisor | Fernandes , Mónica Teotónio | |
| dc.contributor.advisor | Bragança, José | |
| dc.contributor.author | Matos, Alexandra Sofia Soares Curado de | |
| dc.date.accessioned | 2025-07-28T11:21:15Z | |
| dc.date.available | 2025-07-28T11:21:15Z | |
| dc.date.issued | 2024-11-12 | |
| dc.description.abstract | The most prevalent and severe malignant brain tumor, glioblastoma (GBM), is marked by a high rate of brain invasion, resistance to treatment, and an overall poor prognosis. A heterogeneous population of cells, including a subpopulation of more undifferentiated cells called glioblastoma stem-like cells, make up these tumors. This subpopulation may be the source of therapy resistance and relapse, thus targeting these cells may be more successful. Therefore, it is essential to comprehend the biology of these cells in order to identify potential therapeutic targets. In both adult and embryonic stem cells, CITED2 is a crucial pluripotency factor and a co-transcriptional modulator. Furthermore, it has been linked to a number of cancer types, having either pro- or anti-tumorigenic roles. However, a possible role in GBM has not yet been documented. Thus, the objective of this study was to determine the impact of CITED2 modulation on the biology of GBM. Three GBM cell lines were selected for this investigation to assess the effect of CITED2 expression. Concerning the modification of CITED2, clones in GBM cell line models that had both overexpression and knockdown of CITED2 were created. We observed effects on the metabolic activity, proliferation, migration, cell cycle progression, cell death, clonogenic potential, tumorigenic potential and invasion when CITED2 was overexpressed and knocked down. Taken together, the present study on CITED2 biology suggests a potential role in glioblastoma. The ability to self-renew, the metabolic activity, clonogenic and tumorigenic potential, cell death and invasion are all indicators of this effect. Considering the results of this study, it will be important to further investigate the specific role of CITED2 in GBM cell biology and to explore whether CITED2 itself or the pathways activated by CITED2 could serve as potential therapeutic targets. | eng |
| dc.description.abstract | O glioblastoma é um glioma tipo 4, com o gene IDH não mutado, e é o tumor primário maligno mais comum e letal entre os tumores cerebrais. Este tumor é caracterizado pela sua alta capacidade infiltrativa do cérebro e é composto por uma população bastante heterogénea, que inclui uma subpopulação mais indiferenciada, designada por células de glioblastoma semelhantes a células estaminais. O glioblastoma é geralmente tratado através de cirurgia, quimioterapia e radioterapia, porém este tumor apresenta resistência aos tratamentos e em várias situações ocorre a recorrência deste tumor. As células de glioblastoma semelhantes a células estaminais já foram indicadas como as responsáveis pela resistência a tratamentos e recorrência deste tumor, contribuindo portanto para o característico prognostico adverso. Porém, como os tratamentos indicados para este tipo de tumor são generalizados, e sendo este tumor bastante heterogéneo, os tratamentos não são muito eficazes. Como tal, o entendimento dos mecanismos de estaminalidade nas células destes tumores é extremamente necessária para desvendar potenciais alvos terapêuticos. O CBP/p300 interacting transactivator with Glu/Asp rich Carboxy-Terminal Domain 2 (CITED2) é um modulador co-transcriptional e um importante fator para a pluripotência, tanto em células estaminais embrionárias como em células estaminais adultas. Esta proteína apresenta diversas funcionalidades nestas células, no desenvolvimento embrionário, como por exemplo no desenvolvimento do coração e na regulação das células estaminais adultas como as celulas estaminais hematopoieticas. O CITED2 já foi implicado em diferentes cancros, tais como cancro do pulmão, mama, leucemias, entre outros. O seu papel, apesar de ter sido pouco explorado nestes cancros, já demonstrou papeis pró-tumorigenicos e anti-tumorigenicos. Contudo, o seu papel em glioblastoma não foi reportado anteriormente. O objetivo principal deste estudo foi avaliar o impacto do CITED2 nas funcionalidades biológicas de modelos celulares de glioblastoma. A modulação do CITED2 foi realizada em três linhas celulares imortalizadas de glioblastoma, duas linhas com elevada expressão e uma linha com baixa expressão de CITED2. As características biológicas analisadas neste estudo foram a atividade metabólica, ciclo celular, morte celular, proliferação, migração, além do potencial clonogénico, tumorigénico e invasivo aquando da modulação do CITED2. Inicialmente, procedeu-se à sobreexpressão do CITED2 na linha celular LN229 e subexpressão nas linhas celulares A172 e U118. Esta modulação do CITED2 foi confirmada ao nível da expressão de mRNA e da proteína, pelo método de RT-qPCR e western blot, respetivamente. Usou-se então as linhas celulares preparadas em ensaios funcionais para avaliar o efeito da modulação da expressão de CITED2 na proliferação, atividade metabólica, autorenovação, formação de esferas, migração, ciclo celular e morte celular. Avaliou-se também a expressão de marcadores de estaminalidade, especificamente a expressão de NES e SOX2. No teste de proliferação realizado, denotou-se que a modulação do CITED2 afeta a capacidade proliferativa, sendo que a proliferação das células demonstrou uma tendência para diminuir em ambas a sobreexpressão e subexpressão, apesar de não demonstrar diferenças significativas. Aquando do uso de citometria de fluxo para avaliar o ciclo celular evidenciou-se que em ambas as expressões de CITED2, não ocorreu nem diferenças significativas em relação ao número de células nas diferentes fases do ciclo celular. Já na morte celular, também realizada por citometria de fluxo, denotou-se, tanto na sobreexpressão como na subexpressão de CITED2 um ligeiro aumento da quantidade de células em apoptose, diferenças estas que não foram observadas no caso da necrose. Em relação à migração, não se observou diferenças significativas aquando da alteração da expressão de CITED2, porém, na sobreexpressão denotou-se uma tendência para as células migrarem mais individualmente quando comparadas com os controlos onde se observou uma migração mais uniforme. No caso da subexpressão de CITED2, essa tendência não foi observada. Quando analisada a atividade metabólica denotou-se uma maior atividade nas células com sobreexpressão de CITED2, enquanto, nas células com subexpressão, apesar de não de observar diferenças significativas, observou-se uma tendência para esta atividade diminuir. No teste de formação de colónias, para avaliar a capacidade de auto-renovação e sobrevivência através de uma única célula, evidenciou-se uma maior capacidade de formação de colónias por células com um aumento da expressão de CITED2, enquanto que, com a diminuição da expressão de CITED2, diminui a quantidade de colónias formadas. Na análise da expressão dos marcadores de estaminalidade, NES e SOX2, observou-se que na sobreexpressão de CITED2 em células em monocamada, houve um aumento da expressão de NES, enquanto SOX2 apenas demonstrou uma tendência a diminuir. Porém, nas células na qual se reduziu a expressão de CITED2, não foi detetada a expressão de NES, e a expressão de SOX2 não demonstrou diferenças significativas. Na análise dos esferóides formados no teste de formação de esferóides, apesar de não se observar diferenças significativas nas dimensões dos esferóides provenientes das células com sobreexpressão de CITED2, verificou-se que a densidade celular apresentava-se menor. Já nos esferóides derivados das células com subexpressão não se observou nem diferenças nas dimensões, nem na densidade celular dos mesmos. A expressão dos marcadores de estaminalidade nos esferóides foi realizada apenas nos esferóides derivados da sobreexpressão de CITED2 devido à impossibilidade de se obter esferóides com maiores dimensões para a linha celular A172. Nos esferóides analisados denotou-se que a expressão CITED2 manteve-se elevada nas células com sobreexpressão, NES estava aumentado nas células com sobreexpressão de CITED2 e SOX2 não demonstrava diferenças de expressão. O último teste realizado, o teste de invasão em matrigel, foi realizado apenas com esferóides com sobreexpressão de CITED2, devido às dimensões dos esferóides derivados da subexpressão terem dimensões reduzidas. Neste teste observou-se que os esferóides formados por células com sobreexpressão de CITED2 permanecem mais compactos, libertando menos células para migrar no matrigel, o que sugere que as células com sobreexpressão de CITED2 não possuem uma capacidade invasiva comparável aos controlos. De forma geral, os dados recolhidos para o estudo do impacto da modulação do CITED2 indicam a influência deste nos fatores biológicos em células de glioblastoma. A influência da modulação pode ser observada na morte celular, bem como na capacidade de auto-renovação, atividade metabólica e viabilidade, migração e no potencial tumorigénico e clonogénico. Considerando os resultados deste estudo, será importante investigar mais detalhadamente o papel específico do CITED2 na biologia celular do glioblastoma e explorar se o próprio CITED2 ou as vias ativadas por CITED2 poderiam constituir potenciais alvos terapêuticos. | por |
| dc.identifier.tid | 203911954 | |
| dc.identifier.uri | http://hdl.handle.net/10400.1/27503 | |
| dc.language.iso | eng | |
| dc.rights.uri | http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/ | |
| dc.subject | Unveiling a potential | |
| dc.subject | Glioblastoma biology | |
| dc.subject | Cancers | |
| dc.subject | Modulation on the biology | |
| dc.title | Unveiling a potential role for CITED2 in Glioblastoma Biology | eng |
| dc.type | master thesis | |
| dspace.entity.type | Publication | |
| thesis.degree.grantor | Universidade do Algarve. Faculdade de Medicina e Ciências Biomédicas | |
| thesis.degree.level | Mestre | |
| thesis.degree.name | Mestrado em Oncobiologia - Mecanismos Moleculares do Cancro |