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Faculdade de Medicina e Ciências Biomédicas

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http://hdl.handle.net/10400.1/9941

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Browsing Faculdade de Medicina e Ciências Biomédicas by advisor "Andrade, Raquel"

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  • Elucidação do papel de Brachyury no desenvolvimento do sistema nervoso central
    Publication . Militão, Inês Torradinhas; Andrade, Raquel; Araújo, Inês
    Brachyury é um fator de transcrição responsável pelos movimentos morfogénicos durante o processo embriológico da gastrulação para formar as camadas germinativas mesoderme e endoderme. Participa ainda na manutenção de características estaminais das células no botão caudal, garantindo a elongação do eixo anteroposterior do embrião. No adulto, a expressão de Brachyury é diminuta na maioria dos tecidos provenientes da mesoderme, endoderme e ectoderme não-neural. No tecido cerebral adulto, no entanto, é possível detetar expressão de Brachyury. Experiências prévias no laboratório mostraram que Brachyury participa da diferenciação neural, e a diminuição da sua expressão está associada a Gliomas, o tumor mais agressivo do cérebro. Neste trabalho procurou-se compreender quando e onde é expresso Brachyury ao longo do desenvolvimento do sistema nervoso central e qual é a sua função. Através da técnica de hibridação in situ aplicada a embriões de galinha em diversos estadios de desenvolvimento, observou-se que Brachyury é primeiramente expresso nas células da crista neural cranial no estadio HH13 e que, mais tarde, é expresso nas regiões dorsais do telencéfalo e diencéfalo, assim como na região do istmo. Brachyury co-localiza com os genes Pax6 e Wnt8b nestas estruturas. Com recurso à técnica de eletroporação in ovo, foi feita a sobre-expressão de Brachyury e observou-se que não alterou a expressão do gene Wnt8b no cérebro em desenvolvimento. Neste trabalho, foi também iniciada a otimização da técnica de imunohistoquímica in toto, para localização da proteína Brachyury, bem como da técnica de RT-qPCR de forma a genotipar embriões de murganho provenientes do cruzamento de mutantes T+/-, para estudos futuros. É necessário continuar o processo de otimização, focando no desenho de novos primers, os Intron-spanning primers.
    2024-11-12Master thesis Embargoed access Show more
  • Unveiling a putative hairy-microtubules protein interaction in early Drosophila development
    Publication . Cavaco, Gonçalo José Teixeira; Silva, Rui; Andrade, Raquel
    Animal development requires careful spatiotemporal positional information. Such information allows development of the different organs and tissues in the correct order and position during subsequent steps of differentiation. In Drosophila this is achieved through segmentation which divides the embryo in 14 segments: 3 segments make up the head with its antennae and mouth parts, 3 segments make up the thorax and 8 the abdomen. In Drosophila early embryogenesis, the embryo undergoes 13 rounds of rapid, synchronized nuclear division without cytokinesis, leading to the formation of a syncytial blastoderm with more than 6000 nuclei in a shared cytoplasm. The molecular events leading to larvae body segmentation are initiated by maternally derived signals and propagated by a genetic cascade of more than 30 different genes, culminating in the establishment of segment-specific gene expression patterns. To this purpose, the protein of that gene can only execute its function when it is in the correct position in the shared cytoplasm. This is achieved by selective silencing and active transport of the mRNA to the correct position, a process that normally requires the recognition of cis-acting elements, formation of ribonucleoproteins and Dynein-mediated transport along microtubules. In several cases, protein localization remains normal in conditions in which RNA localization is abrogated, implying additional mechanisms for segment individualization. hairy is a Drosophila pair-rule gene that regulates the development of alternate segments in the Drosophila embryo, and its mRNA location is achieved through dynein-mediated transport of RNA particles. Previous results from our lab found an interaction between chicken hairy1 and microtubule proteins in a yeast two-hybrid screen. We hypothesize that microtubule interaction of the hairy protein is conserved in Drosophila and plays a role in segment individualization. The aim of this master proposal is to investigate the interaction between hairy protein and microtubules in Drosophila. This will be performed using different genetic, biochemical and cell biology approaches. Namely, (1) in vivo imaging of hairy protein localization during successive stages of Drosophila embryo development, using a transgenic reporter line containing a fluorescent hairy fusion reporter; (2) sample preparation for mass-spectroscopy identification of hairy protein interactors; (3) in toto immunohistochemical detection of candidate hairy protein interactors; (4) in vivo imaging of hairy protein localization after microtubule depolymerization during early stages of development.
    2025-02-18Master thesis Open access Show more