Browsing by Author "Fernandes, Laura"
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- Aplicação de técnicas de conservação in vitro para a conservação de espécies ameaçadasPublication . Fernandes, Laura; Romano, Anabela; Gonçalves, SandraÉ cada vez maior o numero de espécies que se encontram ameaçadas de extinção no seu habitat natural, existinto uma necessidade crescente de elaborar estratégias para a sua conservação. Com os avanços na área da biotecnologia vegetal tal torna-se possível, recorrendo por exemplo a técnicas de cultura in vitro. Este trabalho focou-se em duas espécies endémicas algarvias, Tuberaria major e Plantago algarbiensis, que apesar de se saber que se encontram em perigo de extinção, nada foi feito no sentido de estabelecer métodos que visem a sua conservação. Relativamente à espécie T. major foi estudada a germinação in vitro de sementes e a partir dos rebentos originados estabeleceu-se um protocolo de micropropagação tendo em vista a produção em massa de plantas. O meio MS com 0,2 mg l-1 Zea demonstrou ser o meio mais eficaz para produzir elevada quantidade de rebentos. Na fase de enraizamento, a redução dos sais do meio basal foi o parâmetro que mais contribuiu para o sucesso desta fase. Após 6 semanas de aclimatização obteve-se um máximo de 97% de sobrevivência. Numa fase posterior foram estudadas duas vias de conservação de germoplasma desta espécie, a criopreservação de sementes e a criopreservação de ápices recorrendo a três métodos distintos, a vitrificação, a vitrificação “droplet” e o encapsulamento-desidratação. O encapsulamento-desidratação demonstrou ser o método mais eficaz, no qual 67% dos ápices formaram rebentos após criopreservação. No caso de P. algarbiensis foi estudada a organogénese a partir de explantados foliares destacados de rebentos provenientes de germinação in vitro de sementes. Os melhores resultados em termos de formação de rebentos foram observados em meio MS suplementado com 4 mg l-1 BA + 1 mg l-1 IAA. Este trabalho demonstra que as técnicas de conservação in vitro podem ser utilizadas com sucesso para a conservação das espécies T. major e P. algarbiensis.
- Germination requirements and cryopreservation tolerance of seeds of the endangered species Tuberaria majorPublication . Gonçalves, Sandra; Fernandes, Laura; Pérez-García, Felix; González-Benito, María Elena; Romano, AnabelaThe germination requirements and the cryopreservation tolerance of Tuberaria major (Cistaceae) seeds, an endangered plant species endemic from the Algarve region (South of Portugal) were studied. The final germination percentage of untreated seeds was very low (less than 2%) and was significantly improved by heat treatments (maximum of 54%). No significant differences were observed among the germination percentages reached by seeds submitted to boiling water or dry heat (100°C for different periods: 15, 30 and 60 min). Moreover, the temperature regime did not affect the final germination percentage. Cryopreservation did not affect the germination rate in comparison with the control, although the heat treatment was still necessary after cryopreservation. In conclusion, it was observed that heat stimulated germination of T. major seeds and cryopreservation could provide a method for long-term storage of germplasm of this endangered species.
- High-frequency in vitro propagation of the endangered species Tuberaria majorPublication . Gonçalves, Sandra; Fernandes, Laura; Romano, AnabelaA novel protocol suitable for the micropropagation of the endangered species Tuberaria major using seedlings as explants is reported. Using this protocol, we studied the effects of explant type (apical shoots and nodal segments) and cytokinins [6-benzyladenine (BA), kinetin,and zeatin (ZEA)] on shoot proliferation. Explant type significantly influenced the proliferation frequency and mean number of shoots, with nodal segments showing a higher proliferation capacity. The mean number of shoots was significantly higher when the explants were cultured in half-strength (1/2) MS medium supplemented with 0.2 mg l-1 BA (6.83 ± 0.77 shoots) or ZEA (6.55 ± 0.71 shoots). The shoots showed a great rooting capacity that was significantly influenced by the concentration of MS macronutrients but not by the concentration of auxins. The highest rooting frequencies (97–100%) were obtained in 1/2 MS medium with or without plant growth regulators. The plants obtained were easily acclimatized to ex vitro conditions, with 97% surviving after 6 weeks. The micropropagated plants were successfully reintroduced into their natural habitat and exhibited normal development. In conclusion, our culture protocol, with efficient seed germination, subsequent multiplication of nodal explants using ZEA at 0.2 mg l-1, and successful ex vitro establishment of well-rooted plantlets on 1/2 MS medium, provides a simple and reliable methodology for the large scale propagation of T. major, thereby contributing to germplasm preservation of this endangered species.