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- Estudo do papel de genes interagindo funcionalmente/fisicamente com Cited2 na biologia das células estaminais embrionáriasPublication . M., Trindade; Bragança, José Eduardo MarquesAs células estaminais embrionárias são caracterizadas por possuírem a capacidade de se auto-renovarem indefinidamente em cultura e por possuírem a capacidade de se diferenciarem em qualquer tecido ou célula de um organismo adulto (pluripotência). As funções das células estaminais embrionárias são controladas por factores extrínsecos e intrínsecos, sendo os factores de transcrição Nanog, Oct4 e Sox2 proteínas chaves para manter a pluripotência. No entanto, existem factores de transcrição auxiliares que também participam na regulação destes e de outros genes importantes para a pluripotência, tais como Zic3, Smad2/3, Tbx3, Klf4 por exemplo. Cited2 é um factor de transcrição importante para múltiplos processos do desenvolvimento embrionário de ratinho, cuja sobrexpressão é capaz de manter as células estaminais de ratinho com características de pluripotência na ausência do factor inibitório da leucemia (LIF) necessário para impedir a diferenciação das células estaminais embrionárias de ratinho em cultura. Neste trabalho experimental os principais objectivos foram verificar o efeito do factor Cited2 no controlo da actividade do promotor de Nanog em conjunto com outros factores de transcrição e determinar a influência da sobrexpressão de Cited2 no estado de metilação da lisina 4 da histona H3 (H3K4) nos promotores dos genes Nanog, Oct4 e Tbx3. Os nossos estudos revelaram que o Cited2 possui interacções com vários domínios do promotor de Nanog. Observou-se também que o Cited2 não altera significativamente o estado de metilação H3K4 dos promotores de Nanog e Oct4, contudo parece estar a influenciar negativamente o estado de metilação de Tbx3. Verificou-se ainda que a sobrexpressão de Cited2 provoca um aumento da actividade do promotor de Nanog, em aproximadamente duas vezes. Nas nossas condições, também observamos um efeito cooperativo modesto mas significativo entre Smad2, Zic3 e Cited2 para activar o promotor de Nanog, enquanto a sobrexpressão de Nanog e p53 em presença ou ausência de Cited2 reduzem a actividade deste promotor.
- PACAP system evolution and its role in melanophore function in teleost fish skinPublication . CR Cardoso, Joao; C. Félix, Rute; Martins, Rute; M., Trindade; G Fonseca, Vera; Fuentes, Xoan; Power, DeborahPituitary adenylate cyclase-activating polypeptide (PACAP) administered to tilapia melanophores ex-vivo causes significant pigment aggregation and this is a newly identified function for this peptide in fish. The G-protein coupled receptors (GPCRs), adcyap1r1a (encoding Pac1a) and vipr2a (encoding Vpac2a), are the only receptors in melanophores with appreciable levels of expression and are significantly (p < 0.05) down-regulated in the absence of light. Vpac2a is activated exclusively by peptide histidine isoleucine (PHI), which suggests that Pac1a mediates the melanin aggregating effect of PACAP on melanophores. Paradoxically activation of Pac1a with PACAP caused a rise in cAMP, which in fish melanophores is associated with melanin dispersion. We hypothesise that the duplicate adcyap1ra and vipr2a genes in teleosts have acquired a specific role in skin and that the melanin aggregating effect of PACAP results from the interaction of Pac1a with Ramp that attenuates cAMP-dependent PKA activity and favours the Ca(2+)/Calmodulin dependent pathway.