Recombinant proteins in differentiation of stem cells

Nascimento, Ana Rita Fragoso

Publication

Recombinant proteins in differentiation of stem cells

2016-02-05Master thesis

datacite.subject.fos	Ciências Médicas::Ciências da Saúde	pt_PT
datacite.subject.fos	Engenharia e Tecnologia::Outras Engenharias e Tecnologias	pt_PT
dc.contributor.advisor	Bragança, José
dc.contributor.advisor	Ferreira, Guilherme
dc.contributor.author	Nascimento, Ana Rita Fragoso
dc.date.accessioned	2016-05-18T13:21:25Z
dc.date.available	2017-05-18T00:30:08Z
dc.date.issued	2016-02-05
dc.date.submitted	2015
dc.description	Dissertação de Mestrado, Ciências Biomédicas, Departamento de Ciências Biomédicas e Medicina, Universidade do Algarve, 2016	pt_PT
dc.description.abstract	A utilização de cardiomiócitos derivados de células estaminais embrionárias (ESC) permite-nos acesso a um grande número de células para investigação biomédica e uso de fármacos ou ensaios toxicológicos. Apesar de ser possível aumentar a eficiência de diferenciação através de manipulação genética sobre expressando fatores cardíacos específicos, os protocolos atuais são bastante morosos, têm baixo rendimento e são dificilmente reprodutíveis. A transdução proteica é um método alternativo para aumentar a eficácia de diferenciação de células estaminais embrionárias em cardiomiócitos. O objetivo consistiu na construção de uma proteína quimérica com a capacidade intrínseca de transdução celular. Produzimos e purificámos esta proteína recombinante, com a capacidade de atravessar a membrana celular, sendo composta por dois domínios: a proteína humana CITED2, ligada através do domínio terminal-N a um Domínio de Transdução Proteica (PTD), rico em argininas, que confere a capacidade de transduzir proteínas biologicamente ativas e entregá-las no interior da célula. Com este trabalho, conseguimos demonstrar que esta proteína recombinante CITED2, quando adicionada ao meio de cultura celular, atravessa a membrana celular, alcança o núcleo, e é funcional. Em células embrionárias de ratinho (mESC), o knockout do gene Cited2 leva à diferenciação destas células em cardiomiócitos. A suplementação com a proteína recombinante CITED2, no segundo dia de diferenciação, no meio de cultura em que as células tinham sofrido a depleção de Cited2, tem a capacidade de compensar os defeitos na diferenciação cardíaca. Por outro lado, se o meio de cultura for suplementado na fase inicial de diferenciação (dia 0), enquanto as células ainda se encontram num estado de pluripotência, sugere um atraso no processo de diferenciação geral. Apesar de serem necessários estudos mais aprofundados, a aplicação direta da proteína desenvolvida parece ter a capacidade de substituição dos efeitos causados pela proteína endógena, sugerindo assim que a proteína CITED2 desempenha um papel importante tanto em cardiogénese como em pluripotência.	pt_PT
dc.identifier.tid	202177645
dc.identifier.uri	http://hdl.handle.net/10400.1/8270
dc.language.iso	eng	pt_PT
dc.rights.uri	http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
dc.subject	Diferenciação cardíaca	pt_PT
dc.subject	Cited2	pt_PT
dc.subject	Células estaminais embrionárias de ratinho	pt_PT
dc.subject	Domínio de Transdução Proteica	pt_PT
dc.subject	Proteína recombinante	pt_PT
dc.title	Recombinant proteins in differentiation of stem cells	pt_PT
dc.type	master thesis
dspace.entity.type	Publication
rcaap.rights	openAccess	pt_PT
rcaap.type	masterThesis	pt_PT
thesis.degree.grantor	Universidade do Algarve. Departamento de Ciências Biomédicas e Medicina	pt_PT
thesis.degree.level	Mestre	pt_PT
thesis.degree.name	Mestrado em Ciências Biomédicas	pt_PT