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O papel do regulador transcricional CITED2 na leucemia linfoblástica aguda de linfócitos T
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Abstract(s)
A leucemia linfoblástica aguda de Linfócitos T (LLA-T) é uma neoplasia agressiva de
precursores de células T do timo, que afeta principalmente crianças e adolescentes. A
identificação de fatores moleculares que controlam a iniciação e progressão da LLA-T é
fundamental para desenvolvimento de terapêuticas mais específicas e eficientes. Devido
a atividade de fatores de transcrição estar muitas vezes desregulada na LLA-T e o
regulador transcricional CITED2 controla diversos processos no desenvolvimento e
oncogénese, levando assim ao objetivo principal, verificar se o CITED2 está envolvido
na iniciação e/ou progressão da LLA-T, para se cumprir este iremos verificar se o
CITED2está expresso nas linhas celulares leucémicas, quais os seus efeitos e por último
verificar se o seu promotor é influenciada por três vias de sinalização: JAK-STAT, NFkB
e NOTCH1.
Analisou-se a expressão de CITED2 em linhas celulares de leucemia
linfoblástica das células T e de células T normais, realizando o PCR quantitativo.
Verificou-se que todas as células expressavam o CITED2, algumas com elevada
expressão, por exemplo a linha celular EL4.2 expressa sete vezes mais Cited2 que os
timócitos normais. Selecionou-se duas linhas celulares, EL4.2 e as DND41, para efetuar
a subexpressão de CITED2, utilizando um plasmídeo lentiviral que expressa um RNA
de interferência contra o CITED2. Conseguimos obter transdução estável deste
plasmídeo para a linha celular DND41, tendo então efetuado análises de proliferação
celular em meio de cultura normal ou meio com redução de soro fetal bovino.
Verificou-se que a linha celular DND41/shCITED2 apresentava um maior crescimento
celular comparando com a linha DND41/pLKO.1, sendo significativo, a partir das 48
horas, mas análise das fases do ciclo celular não demonstrou qualquer diferença.
Analisou-se a resistência destas linhas celulares à apoptose, tratando as células com
dexametasona, um agente quimioterápico para leucemias LLA-T. Observou-se que
existe uma ligeira tendência para a linha celular DND41/shCITED2 ser mais resistente à
apoptose. Mas nas linhas celulares sem tratamento, verificou-se diferenças na fase
G0/G1 e G2/M, sendo que a linha celular DND41 sh CITED2 apresenta mais células
com ciclo celuar ativo.
Analisou-se no presente trabalho, se o promotor do CITED2 seria influenciando
pela ativação das vias de sinalização JAK-STAT, NF-kB e NOTCH1. Os nossos
resultados indicam que a ativação destas vias regulam negativamente o promotor do
CITED2.
Tendo em conta o conjunto dos nossos resultados, podemos concluir que a
inativação do regulador transcricional CITED2 pode contribuir para o desenvolvimento
da LLA-T. No entanto, será necessário desenvolver mais estudos para compreender os
mecanismos subjacentes.
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Keywords
Ciências biomédicas Leucemia linfoblástica CITED2 Células Crescimento celular