Monitorização da actividade bioelectroquímica da bomba de cálcio do retículo sarcoplasmático

Guerreiro, Miguel

http://hdl.handle.net/10400.1/4828

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Authors

Guerreiro, Miguel

Advisor(s)

Aureliano, M.

Gomes, Henrique L.

Cancela, Leonor

Abstract(s)

Neste trabalho foram isoladas vesículas contendo uma proteína, a Ca2+ATPase, a partir do músculo esquelético de Halobatrachus dydactilus. Essas vesículas foram testadas quanto à sua capacidade de ejecção de protões, acoplada à translocação de Ca2+ (que por sua vez está acoplada à hidrólise de ATP), utilizando um novo método mais rápido e mais preciso de monitorização. O novo sistema, acoplado a um computador pessoal correndo um programa específicamente desenvolvido para o efeito (utilizando a linguagem de programação LabVIEW 5.0), permitiu observar a ejecção de protões por estas vesículas, bem como o efeito de um potente inibidor de P-ATPases, o vanádio. Comparando os resultados obtidos com estudos anteriores (Aureliano, M. e Madeira, V.M.C., 1994)[1] utilizando VRS de Oryctolagus cunilicus, foi possível determinar que estas vesículas eram menos eficientes na ejecção de H+ / acumulação de Ca2+ (com um valor médio de 24,2 contra 35 nmol H+.mg proteína-1.min-1, sendo também mais susceptíveis à acção inibitória dos vanadatos. Numa segunda fase, foram estudadas células derivadas de osso de Sparus aurata (linhas celulares Vsa13 e Vsa16), as quais apresentavam um comportamento semelhante às VRS, i. é, acumulavam Ca2+ ejectando protões, como foi verificado neste estudo. Também se verificou existir uma diferença funcional entre as duas linhas, já que as Vsa16 apresentavam uma maior ejecção de H+ / acumulação de Ca2+ face às Vsa13.