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Publicação
Produção e purificação da proteína rica em gla (grp) humana recombinante
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Orientador(es)
Resumo(s)
As proteínas dependentes de vitamina K (VKD) caracterizam-se pela presença de
resíduos de ácido -carboxiglutâmico (Gla), que lhes confere actividade biológica e
elevada afinidade para a ligação ao cálcio. Recentemente foi descoberta uma proteína
VKD com a maior percentagem de resíduos Gla conhecida, designada por Proteína Rica
em Gla (GRP), para a qual é sugerida uma função na modelação fisiológica do cálcio e
na calcificação patológica em tecidos moles.
Existem vários sistemas para a produção de proteínas recombinantes, que podem ser
divididos em dois grandes grupos os sistemas de expressão de procariotas e eucariotas.
As principais vantagens dos sistemas de expressão procariotas são a boa caraterização
genética, a rapidez de crescimento dos hospedeiros e os baixos custos. Contudo, estes
sistemas apresentam como desvantagem, a incapacidade destas células em realizar
modificações pós-tradução nas proteínas, que pode implicar a produção de proteínas não
funcionais e com alterações estruturais. Os sistemas de expressão eucariotas
representam uma alternativa a estes sistemas, embora sejam mais dispendiosos e
complexos, possuem a capacidade de realização de modificações pós-tradução o que
permite a expressão de proteínas mais complexas na sua forma funcional e ativa.
O objetivo inicial deste trabalho consistia na produção, purificação e caraterização
bioquímica da GRP humana recombinante (GRP_MP) e de um péptido homólogo à
região C-Terminal da GRP humana (GRP_Term). Para a produção da proteína
recombinante, foi utilizado um sistema de expressão procariota, através da
transformação de Escherichia coli BL21 Star (DE3). A GRP humana recombinante foi
produzida com sucesso, obtendo-se cerca de 618 μg de proteína purificada a partir de 50
ml de cultura bacteriana.
A obtenção de GRP humana recombinante purificada será uma mais-valia para
posteriores estudos de caracterização bioquímica, funcional e estrutural, podendo ter
relevância para estudos comparativos da função da GRP -carboxilada e da GRP não -
carboxilada.
Descrição
Dissertação de mest., Biologia Molecular e Microbiana, Faculdade de Ciências e Tecnologia, Univ. do Algarve, 2011
Palavras-chave
Biologia molecular Genética molecular Cálcio Proteínas Escherichia coli