Development of a gnotobiotic growth system model for Dicentrarchus labrax larvae: = desenvolvimento de um sistema modelo de crescimento gnotobiótico para larvas de Dicentrarchus labrax

Silva, Polyana Ferreira da

http://hdl.handle.net/10400.1/625

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Authors

Silva, Polyana Ferreira da

Advisor(s)

Dinis, Maria Teresa

Bossier, Peter

Dierckens, Kristof

Abstract(s)

Compostos quimioterapeutas e desinfectantes antimicrobianos, têm sido usados para controlo do ambiente microbiano aquático. Porém, esta prática, promoveu o surgimento e proliferação de estirpes bacterianas resistentes a antibióticos, nos organismos aquáticos e instalações de cultivo, reduziu a eficácia do controlo profilático, transmitiu aos humanos patógenos resistentes e causou impactos ambientais adversos. O emprego de estirpes bacterianas probióticas, é uma alternativa profilática para controlo microbacteriano. Embora a importância do controlo seja reconhecida, o papel e modo de actuação das estirpes probióticas requerem mais estudos. Um melhor reconhecimento dos mecanismos nas relações hospedeiro-microorganismo é essencial ao desenvolvimento de soluções alternativas para controlo de patologias na indústria da aquacultura. Uma estratégia coerente, apreciará o desempenho dos organismos cultivados em condições axénicas, avaliando posteriormente o efeito induzido pelas estirpes suplementares. Um sistema de cultivo gnotobiótico, que promova as condições-chave para avaliação de estirpes diversas, é fundamental. O robalo, Dicentrarchus labrax, economicamente das espécies marinhas mais importantes na Europa, é o modelo perfeito para avaliar tais interacções. Procurou-se conciliar a informação disponível com procedimentos mais recentes e eficazes, estabelecendo um modelo padronizado para o cultivo de larvas gnotobióticas de D.labrax, em circunstâncias as quais, no futuro, poderão ser relevantes à aquacultura industrial. Com vista à obtenção de larvas axénicas, à chegada desinfectou-se a superfície dos ovos, sendo parte das experiências planeadas para estudar o efeito dos protocolos de desinfecção na taxa de eclosão e sobrevivência dos ovos. A densidade bacteriana, baseada no número de colónias de crescimento em meios nutritivos clássicos, após incubação do homogeneizado de ovos/larvas, foi utilizada na avaliação do efeito bactericida dos diferentes tratamentos químicos e verificação do estado axénico, durante a eclosão e desenvolvimento das larvas. Novos dispositivos rotativos e dois regimes com suplementos de duas estirpes diferentes, foram avaliados por análise das taxas de mortalidade/sobrevivência larvar. Embora os dispositivos rotativos causem tensão nas larvas, são provavelmente o melhor meio para manter bactérias e células de fermento em suspensão. O sistema em desenvolvimento permitiu ajustar variáveis importantes, suportando uma eclosão em ambiente axénico e manutenção eficaz das larvas em condições gnotobióticas durante 13 dias. A desinfecção superficial com 100 mg.L-1 glutaraldeído durante 5 min, suplementada com antibióticos (ampicilina e rifampicina, 10 mg.L-1 cada), foi eficaz na redução da carga microbiana, melhorando significativamente as taxas de sobrevivência larvar, dos grupos em avaliação. Num contexto geral, nenhuma diferença de maior, fora observada entre o padrão de desenvolvimento morfológico dos indivíduos cultivados nos grupos de controle e desinfecção com glutaraldeído, respectivamente. Aeromonas hydrophila, leveduras de padeiro Saccharomyces cerevisiae (estirpe selvagem) e seu mutante isogénico mnn9, agiram como estirpes microbianas neutras, sem influenciar o desenvolvimento larvar durante os primeiros treze dias.