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- Avaliação da intervenção do farmacêutico no tratamento das dislipidemiasPublication . Rodrigues, André Filipe Cabrita; Silva, Isabel Maria Júlio daAs doenças cardiovasculares são a principal causa de mortalidade a nível mundial e em Portugal e, por isso, a redução dos fatores de risco a elas associadas, constituem um fator importante para evitar a ocorrência deste tipo de doenças. A hipercolesterolemia representa um dos fatores de risco para as doenças cardiovasculares e com uma prevalência de 47% em Portugal. O farmacêutico, enquanto profissional de saúde, privilegia do contacto direto com o doente, podendo intervir com o objetivo de instruir o utente na adoção de medidas eficazes no que diz respeito ao aperfeiçoamento do seu perfil lipídico. Pretendeu-se, com este trabalho, avaliar a intervenção do farmacêutico no tratamento da dislipidemia, de forma a verificar até que ponto a abordagem do farmacêutico ao utente pode ser benéfica no que diz respeito aos níveis lipídicos a atingir no intervalo dos valores de referência de forma a reduzir a probabilidade de ocorrência de um evento cardiovascular. Foram analisados 12 estudos publicados relacionados com a abordagem da intervenção do farmacêutico na dislipidemia. Nos diferentes estudos, foi seguida a evolução dos níveis lipídicos de colesterol total, colesterol LDL (low density lipoproteins) (c-LDL), triglicéridos e colesterol HDL (high density lipoproteins) (c-HDL) de pacientes divididos em grupos de intervenção e grupos controlo, sendo que o primeiro grupo recebeu intervenção e cuidados farmacêuticos, enquanto que ao grupo controlo não foi prestada qualquer intervenção. De uma forma geral, verificou-se que os grupos alvo de intervenção farmacêutica sofreram uma redução mais significativa dos seus parâmetros lipídicos iniciais de CT, c-LDL e TG em comparação com os grupos controlo. Por outro lado, os níveis séricos iniciais de c-HDL não sofreram a evolução preconizada, o seu aumento, mas pelo contrário, na maioria dos estudos, esses níveis mantiveram-se ou reduziram.
- O Referencial de educação para o desenvolvimento: as conceções do conceito de paz por um grupo de crianças de 2 a 5 anosPublication . Hauwaert, Axelle Marie Veronique Thierry van; Gonçalves, Carla Alexandra Lourenço Duarte Rocha Dionísio; Horta, Maria Helena Martins da CruzCom o surgimento de problemáticas que colocam em risco toda a humanidade, é importante sensibilizar as crianças e os jovens do país e do mundo sobre os mesmos e incentivá-los a refletir sobre formas de poder resolvê-los. Foi nesse sentido que surgiu o Referencial de Educação para o Desenvolvimento 2016, um documento de referência que promove a exploração de problemáticas da atualidade em todos os níveis e ciclos de educação e ensino, sendo um destes temas a paz. Com este estudo pretendeu-se detetar as conceções de crianças de 2 a 5 anos acerca dos diversos significados do conceito paz, bem como averiguar se uma intervenção pedagógica contextualizada amplia os seus conhecimentos sobre os significados de paz. Para atingir estas finalidades, utilizou-se uma metodologia de cariz qualitativo, de paradigma interpretativo, recorrendo-se ao método de estudo de caso, onde se fez uso de várias técnicas e instrumentos de recolha de dados: observação participante, notas de campo, inquéritos por questionário, inquéritos por entrevista e registos audiovisuais. Participaram neste estudo vinte e cinco crianças, os respetivos encarregados de educação, duas auxiliares da ação educativa e uma educadora de infância. Os resultados evidenciaram que, no início do estudo, as crianças não aparentavam ser conhecedoras do conceito de paz e, muito menos, dos diferentes significados que este conceito acarreta. Após a dinamização de uma intervenção pedagógica contextualizada, observou-se que as crianças demostravam outro nível de conhecimentos sobre os significados do conceito de paz, o que provou que uma intervenção pedagógica contextualizada amplia os conhecimentos de crianças de 2 a 5 anos acerca dos diversos significados deste conceito.
- Exposição ocupacional a medicamentos citotóxicos: consequências a longo prazo e prevençãoPublication . Costa, João Francisco Charraz Godinho Carrilho; Braz, L.Apesar do objetivo do tratamento quimioterápico antineoplásico consistir no combate às células malignas, certo é que atua também sobre as células benignas, afetando, desta forma, o genoma das células normais. Os principais efeitos nefastos detetados a longo prazo foram: infertilidade, malformações congénitas, mutagenicidade e abortos espontâneos. Assim, os profissionais que trabalham nesta área têm diferentes tipos de exposição aos citotóxicos, o que constitui motivo de preocupação tendo em conta a gravidade das consequências. Está comprovado que a adesão aos procedimentos de trabalho adequados e recomendados diminuem substancialmente a exposição dos profissionais aos medicamentos citotóxicos e que o conhecimento destes procedimentos de segurança é de extrema importância para diminuir os riscos de exposição. Deste modo, pretende-se com esta dissertação, analisar os riscos advenientes da exposição ocupacional de medicamentos citotóxicos bem como a utilização de sistemas que isolem os medicamentos do operador durante o processo de manipulação, com a finalidade de diminuir exponencialmente os danos para a saúde de profissionais, pacientes e demais intervenientes no circuito dos medicamentos citotóxicos, com especial relevância na prevenção.
- Os retábulos capuchos das Províncias da Piedade e da SoledadePublication . Pignaton, Ariadne Barreto; Santos, José António C.A regra de São Francisco distanciou-se dos seus rigores, obrigando a reformas para corrigir práticas, que o tempo foi introduzindo no seio da Ordem. Destas reformas surgiu a Congregação do Santo Evangelho com o nome de Capuchos ou Ordem Capucha. Com o apoio do Duque de Bragança, os Frades Capuchos fundaram o primeiro convento, evocado à Nossa Senhora da Piedade, no ano de 1500, em Vila Viçosa. O crescente sucesso que alcançavam, aliado às reformas que haviam implantado, incrementou o número de seguidores que os apoiavam, levando-os a construir outros conventos em território nacional. Em 1509, um Breve do Papa Júlio II oficializou a Ordem que, em 1517, é elevada de Custódia da Piedade a Província da Piedade. O número elevado de conventos provocou dificuldades administrativas, o que obrigou a Província a dividir-se, demarcando o território através da linha do Tejo. Os conventos do Alentejo e do Algarve permaneceram na Província da Piedade, os da Beira e de Entre Douro e Minho passaram a constituir uma nova Província, a da Soledade. As esmolas que os Frades Capuchos recebiam permitiram ornamentar o interior dos templos com a arte retabular, um instrumento catalisador da fé, pois através das imagens envolvia os fiéis nas celebrações cristãs que nesses templos eram realizadas. Esta tese de doutoramento tem como objetivos; apresentar um inventário artístico exaustivo dos retábulos existentes nos templos Capuchos das Províncias da Soledade e da Piedade, distribuídos de norte a sul de Portugal; identificar as principais características dos retábulos dos conventos Capuchos integrados nas respetivas conjunturas artísticas, evidenciando as soluções formais e iconográficas patentes em cada uma destas fases; responder à questão da possível existência de uma estética própria da Ordem Capucha em Portugal. O período de execução destas obras circunscreve-se entre a segunda década do século XVII, data aproximada do exemplar mais antigo, e cerca do primeiro quartel do séc. XIX, data do exemplar mais recente. Excluem-se os equipamentos que foram introduzidos após o abandono dos edifícios pelos frades Capuchos, na sequência da extinção das ordens religiosas em 1834. Quanto aos procedimentos metodológicos, a pesquisa, sempre auxiliada com análise bibliográfica, empreendeu visitas in loco onde foi efetuado registo fotográfico. A abordagem foi qualitativa, dada a subjetividade dos métodos utilizados, nomeadamente, a análise fotográfica e a observação direta do objeto de estudo. Na apresentação e interpretação dos dados utilizou-se, também, uma análise quantitativa auxiliada em gráficos e quadros. A elaboração do inventário artístico, unificando as duas províncias da Soledade e da Piedade, e procurando identificar características e particularidades destes retábulos como um conjunto, é um trabalho original, não tendo sido anteriormente realizada nenhuma abordagem com esta perspetiva. Deste modo, o presente trabalho dá a conhecer um vasto património retabular marcado pelas diversas fases artísticas e que se encontra distribuído pelo território português. Assim, este estudo constitui um registo inédito de um património cultural e religioso que tende a desaparecer, visto que os conventos se localizam fora dos centros históricos e são na sua maioria ignorados pelas entidades responsáveis pela manutenção do património nacional.
- Proteção de sistemas de armazenamento de energia elétricaPublication . Serpa, Maria Teresa Marques Dolores; Oliveira, L. M. R.O panorama energético atual caracteriza-se por um aumento do consumo da energia elétrica e pela preferência por tecnologias renováveis e limpas. Por vezes existe capacidade de produção de energia por parte deste tipo de fontes que não é absorvida pelo sistema de energia. Os Sistemas de Armazenamento de Energia (SAE) podem ser utilizados para apoiar em casos de desequilíbrio entre a produção e o consumo, pois permitem armazenar o excedente de produção de energia elétrica de forma a que mais tarde seja consumida, sem que haja necessidade de recorrer à geração fóssil. Num cenário oposto, o SAE pode auxiliar os equipamentos de geração na resposta a défices de produção face às necessidades energéticas, comportando-se como uma fonte de energia elétrica. Neste trabalho foi analisado um SAE constituído por baterias (Battery Energy Storage System, BESS). O objetivo principal deste trabalho é implementar um esquema de proteção que garanta a correta operação do SAE. É fundamental que os dispositivos de proteção atuem de forma fiável e segura, por forma a detetar os defeitos na sua fase mais precoce e assim evitar a propagação de avarias, minimizando os danos no equipamento e reduzindo o período e custos de indisponibilidade
- A importância do IMI e do IMT na estrutura das receitas das autarquias locais: o caso do Município LouléPublication . Coelho, Válter Daniel de Sousa; Salsa, Leonor; Rosado, Pedro BastosO concelho de Loulé, situado na região Algarvia, é o mais extenso e populoso município algarvio. A presente dissertação versa sobre as receitas em sede do Imposto Municipal sobre Imóveis (IMI) e do Imposto Municipal sobre as Transmissões Onerosas de Imóveis (IMT) arrecadadas pela autarquia de Loulé. O constante aumento de receitas verificado na tributação sobre o património, motivado por diversos fatores, confere às autarquias locais um acréscimo de receitas que se têm vindo a intensificar. A metodologia do presente trabalho assenta no estudo de caso uma vez que a presente dissertação se centra nas receitas de impostos sobre o património que o Município de Loulé arrecada. Neste sentido, o objetivo da presente dissertação centra-se na determinação da importância destes dois impostos no conjunto de receitas da autarquia. Com o objetivo de enriquecer o presente trabalho, as receitas de IMI e de IMT da autarquia, serão alvo de comparação com as de outros municípios, cuja escolha se considere pertinente para o presente trabalho. Por fim, à luz dos resultados encontrados é possível depreender que o Município de Loulé é o município de média dimensão que mais receitas arrecada tanto ao nível do IMI como do IMT e que para o alcançar deste resultado em muito contribuí o valor dos imóveis situados no concelho.
- Triângulos e quadriláteros em movimento no 1.º ciclo do ensino básicoPublication . Oelgemöller, Ana Vitorina; Guerreiro, António Manuel da ConceiçãoO presente relatório descreve a componente de investigação da unidade curricular de Prática de Ensino Supervisionada, constituinte do curso de mestrado em Ensino do 1.º Ciclo do Ensino Básico e de Matemática e Ciências Naturais no 2.º Ciclo do Ensino Básico. Este trabalho apresenta a reflexão do potencial que existe entre a articulação de conteúdos da área da matemática e da educação física, particularmente do jogo, nos anos iniciais do ensino básico. Sendo a matemática uma das disciplinas em que os alunos apresentam maior insucesso, procura-se mostrar que a educação física, nomeadamente o jogo, consiste numa atividade prazerosa para o aluno e constitui um possível aliado para despertar o gosto pela matemática e, deste modo, estimular um processo de ensino e de aprendizagem mais significativo desta área de conhecimento. Este relatório defende a necessidade de refletir e de implementar a interdisciplinaridade, de forma consistente, desde os primeiros anos de escolaridade, pois numa sociedade em constante mudança, esta prática educacional e social poderá ser uma mais-valia para fortalecer o desenvolvimento completo da criança e do jovem. O principal objetivo deste estudo consiste na comparação da aprendizagem matemática sobre triângulos e quadriláteros, ao nível do segundo ano de escolaridade, em dois contextos educativos: (i) um contexto caracterizado pelo ensino da matemática com atividades manipulativas e (ii) um contexto de interligação entre a matemática e a educação física, na componente do jogo. Estas atividades seriam implementadas, não fosse a situação pandémica mundial, no ano letivo 2019/2020, numa escola básica de 1.º ciclo do ensino básico, na cidade de Lagos, com alunos do 2.º ano de escolaridade. Tratase de um estudo quantitativo, de tipo exploratório. Os instrumentos de recolha de dados resultam da aplicação de dois testes, num grupo experimental e num grupo de controlo, e dos registos áudio e visuais das interações e das produções dos alunos. Os resultados expectáveis apontam para um nível de motivação distinto, a querer nos estudos empíricos apresentados, nas atividades que envolvem o jogo em interligação com a matemática.
- Production of nanoparticles by polyelectrolyte complexation from novel locust bean gum cationic derivativesPublication . Rodrigues, Miguel Viegas; Costa, Ana M. Rosa da; Grenha, AnaNanoparticles have a wide array of uses, one of which is drug delivery. Nanoparticle drug delivery systems have advantages over conventional drug delivery systems, as they are able to increase bioavailability, solubility and permeability of drugs, while also offering the possibility of targeted delivery and controlled release. The preparation of nanoparticles can follow different procedures, including polyelectrolyte complexation, based on electrostatic interaction of oppositely charged polymers, which was used in this work. There are currently a wide number of anionic polysaccharides to choose from, either from seaweed, animals or microorganisms. Still, when it comes to cationic polysaccharides, the most common choice is chitosan. For this reason, the chemical modification of polysaccharides for obtaining positively-charged derivatives is worth exploring. The main objective of this work was to explore different strategies to chemically modify locust bean gum in order to obtain a cationic polyelectrolyte that, by complexation with carrageenan, affords nanoparticles with the potential for application in the development of drug delivery systems. To achieve this, it was attempted to oxidize locust bean gum to the corresponding aldehyde using different oxidizing reagents and then, by reductive amination, insert amino groups in the polysaccharide structural units. The different oxidation reagents were sodium periodate, TEMPO, Oxone® and ammonium persulfate. All obtained derivatives were analyzed through FTIR spectroscopy to access the success of each reaction. NMR analysis was also performed on amino locust bean gum obtained from periodate oxidized gum, which seemed to indicate a high degree of depolymerization during the reductive step. Nanoparticle production was possible using amino locust bean gum obtained from periodate oxidized gum and carrageenan at mass ratios of 4/1, 1/3 and 1/4. These particles showed similar size, zeta potential and PdI as other locust bean gum based nanoparticles, albeit with a larger deviation.
- Job demands e workaholism: efeitos no conflito trabalho-família e no bem-estar – o caso do setor hoteleiroPublication . Lopes, Sara Catarina Carvalho; Sousa, CátiaAs mudanças ocorridas nos últimos anos, nomeadamente o conceito de família e as elevadas exigências que as empresas depositam nos seus colaboradores, conduziu a uma maior preocupação com a relação e o equilíbrio dos domínios família e trabalho. A incompatibilidade destes dois domínios associada às exigências do trabalho e ao workaholism, acarreta consequências negativas no bem-estar dos colaboradores, nomeadamente no setor hoteleiro. Face à pertinência desta temática, este estudo, de carácter quantitativo, tem como objetivos: 1) observar o efeito das exigências do trabalho sobre o conflito trabalho-família/família-trabalho e sobre o workaholism; 2) observar o efeito do workaholism sobre o conflito trabalho-família/ família-trabalho; 3) assim como observar o efeito destas variáveis sobre o bem-estar dos trabalhadores. Este estudo objetiva ainda observar as vantagens do regime de teletrabalho na conciliação trabalho-família, bem como a existência de diferenças de género nestes tópicos. Com uma amostra de 243 trabalhadores pertencente a uma cadeia de hotéis, com idades compreendidas entre os 18 e os 64 anos (M = 36.67; DP = 11.937), os resultados mostram que as exigências do trabalho e o workaholism são preditores do conflito trabalho-família e que estas variáveis influenciam negativamente o bem-estar dos colaboradores. Observaram-se ainda diferenças entre género na variável workaholism e conflito trabalho-família/família-trabalho, onde os homens apresentam um valor mais elevado comparativamente às mulheres. Neste sentido, é importante que as empresas comecem a pensar na implementação de políticas amigas da família por forma a combater esta desigualdade entre domínios e assim equilibrar a vida profissional com a pessoal dos indivíduos (e.g. teletrabalho, flexibilização de horários).
- Taxonomic and functional microbial dynamics of Sargassum surface biofilms and their response to the coral reef environmentPublication . Haskell, Jasmine Brooke; Frade, Pedro; Aires, TâniaSargassum é uma macroalga frondosa com uma distribuição global ampla em recifes temperados e tropicais. Esta alga providencia habitat e refúgio a diversas espécies marinhas, mas também afecta outras negativamente. Apesar da sua importância ecológica, muito pouco se sabe sobre a vida microbiana nas superfícies de Sargassum. Através do estudo das comunidades microbianas presentes no biofilme da alga Sargassum sp., em paralelo com a água e o sedimento, ao longo de uma série temporal, pretende-se com este estudo entender as dinâmicas de sucessão microbianas do biofilme de Sargassum sp. e de que forma a comunidade microbiana se altera com as alterações ambientais. A amostragem de Sargassum sp., sedimento e água foi feita em Magnetic Island, na Grande Barreira de Coral na Australia, ao longo de um periodo de 13 meses. A sequenciação do gene 16S do rRNA de 30 amostras de Sargassum sp., usando a tecnologia Illumina, permitiu uma análise aprofundada da diversidade taxonomica do biofilme, ao mesmo tempo que o possível perfil funcional de taxa bacterianos chave, foi aferido usando o programa FAPROTAX. A implementação de análise estatística multivariada de ordenação, análises de correlação e estatísticas de abundância diferencial, permitiram investigar a resposta das comunidades bacterianas a parâmetros ambientais abióticos tais como: temperatura e nutrientes orgânicos e inorgânicos. Os biofilmes de Sargassum sp. revelaram estar dominados por bactérias dos Filos Firmicutes (23-45%), Proteobacteria (35-38%) e Bacteroidetes (13-30%) com diferenças observadas entre o Inverno e o Verão. As comunidades bacterianas da água e do sedimento mantiveram-se estáveis ao longo de toda a série temporal equanto que as comunidades associadas com Sargassum sp. revelaram flutuações ao nível da composição bacteriana. Os parâmetros ambientais explicam: 56% da variação da comunidade bacteriana da água, 46% da variação das comunidades associadas com o sedimento e 29% da variação do biofilme de Sargassum sp. Estes resultados sugerem que os mecanismos que medeiam as alterações na composição da comunidade microbiana de Sargassum sp. podem estar relacionados com factores bióticos tais como interação bactéria-bactéria ou interacção entre o hospedeiro e as bactérias associadas (endo e epifíticas), ou ainda interações com outros macroorganismos e seus microbiomas. Este estudo destaca a importância de examinar simultaneamente factores bióticos e ambientais, como forças condutoras de alteração dos microbiomas associados a espécies estruturantes dos recifes de coral.
- O papel de trib2 no metabolismo celular: análise dos níveis de expressão de trib2 em tecidos metabolicamente ativosPublication . Viegas, Vanessa Rodrigues; Sousa-Coelho, Ana Luísa DeA resistência à insulina é um fator chave na patogénese da síndrome metabólica e na diabetes mellitus tipo 2 (DM2), potenciando outros problemas de saúde, tal como o aumento do risco para alguns tipos de cancro. TRIB2 é um dos três membros da família Tribbles de proteínas pseudoquinases. Em vez da fosforilação direta das proteínas alvo, atuam como adaptadores nas vias de sinalização de importantes processos celulares. TRIB2 interage e ativa a proteína AKT associada à supressão da FOXO e dos seus genes alvo. Os fatores de transcrição FOXO são os principais alvos da ação da insulina e a sua desregulação promove o desenvolvimento de diabetes. A via de sinalização PI3K/AKT é uma das mais frequentemente ativadas no cancro, pois a hiperativação de AKT está associada ao aumento da proliferação celular e metabolismo de energia celular. Assim, surgiu a hipótese que TRIB2 pode desempenhar um papel crucial no metabolismo celular. Este trabalho teve o objetivo de avaliar os níveis de expressão de TRIB2 em determinados tecidos metabólicos (fígado, músculo esquelético e tecidos adiposos branco (WAT) e castanho (BAT)) em resposta a condições específicas (obesidade, DM2, resistência à insulina, exposição ao frio, tratamento com rosiglitazona) em amostras de tecidos de humanos e de origem murina, utilizando a base de dados GEO (NCBI). Foi também avaliada quantitativamente a expressão génica de TRIB2 no tecido adiposo de ratinhos magros e obesos, através da realização de reação em cadeia da polimerase (PCR) em tempo real. Na análise GEO verificou-se no fígado uma diminuição da expressão de TRIB2 na obesidade, enquanto que no WAT ocorreu um aumento na mesma condição. Além disso, a sua expressão no WAT diminuiu em resposta ao tratamento com rosiglitazona. No músculo esquelético não se encontraram diferenças significativas na sua expressão na obesidade, DM2 ou resistência à insulina. Ao comparar o BAT e WAT, verificou-se uma expressão preferencial de TRIB2 no WAT. TRIB2 aumentou, no BAT, em resposta ao frio. Na análise quantitativa de TRIB2 no WAT, não foi possível observar alteração estatisticamente significativa na sua expressão dependente da obesidade induzida pela dieta rica em gorduras.
- Perfil de prescrição de anti-hipertensores numa amostra de utentes em farmácia comunitária avaliação do controlo da hipertensão arterialPublication . Palma, Rita Botelho; Condinho, Mónica Sofia LealDefine-se como hipertensão arterial uma elevação persistente da pressão arterial. O aumento crónico da mesma provoca hipertrofia do ventrículo esquerdo e alterações patológicas na vasculatura. Esta patologia está intimamente ligada a eventos cardiovasculares e renais, sendo a principal causa para a ocorrência de eventos como o enfarte do miocárdio e o acidente vascular cerebral. Em Portugal e no resto do mundo é um dos mais importantes problemas de saúde. É de extrema importância controlar a hipertensão arterial para minimizar a morbi-mortalidade cardiovascular. O objetivo principal desta dissertação foi estudar o perfil de prescrição de antihipertensores numa amostra de doentes hipertensos em farmácia comunitária comparando-o com as guidelines nacionais e internacionais. Pretendeu-se, também, avaliar o controlo da hipertensão arterial. Para avaliar o perfil de prescrição foi aplicado um questionário a doentes com idade igual ou superior a 18 anos, que se dirigiram à farmácia participante com uma prescrição para o próprio de, pelo menos, um fármaco anti-hipertensor. Após o preenchimento do questionário mediu-se a pressão arterial do doente. Integraram o estudo 36 participantes, dos quais 23 eram do sexo feminino. Os participantes apresentaram uma média de idades de 65,2 anos. A maioria afirmou ter antecedentes familiares de doença cardiovascular em 1º grau. Além disso, 10 dos participantes já tiveram algum evento cardiovascular. Do estudo efetuado concluiu-se que a classe farmacoterapêutica mais prescrita foram os beta-bloqueadores em monoterapia e os antagonistas renina-angiotensina e bloqueadores dos canais de cálcio em combinação num único comprimido. A combinação de dois fármacos de classes farmacoterapêuticas diferentes no mesmo comprimido melhora a adesão à terapêutica e está de acordo com o indicado nas guidelines de ESH/ESC 2018. Por fim, verificou-se que a maioria (72,2%) dos doentes hipertensos tinham a pressão arterial com valores inferiores a 140/90 mmHg, que se classificou como controlada.
- O contributo dos motivos para beber no consumo de álcool em jovens adultos: efeito moderador das associações implícitas identidade - álcoolPublication . Soares, Ana Rita Rodrigues; Janeiro, LuísOs motivos para beber têm sido os principais preditores do consumo de álcool nos jovens adultos, contudo, novas investigações têm sublinhado a importância dos processos implícitos no consumo de álcool. Para levarmos a cabo uma investigação sobre a influência dos processos implícitos e explícitos no consumo de álcool em jovens adultos definimos dois objetivos, a saber: O primeiro consiste em avaliar o contributo das associações implícitas face ao consumo (processos implícitos) e os motivos para beber (processos explícitos) para o padrão habitual de consumo nos jovens adultos; o segundo, pretende avaliar se as associações implícitas face ao consumo (processos implícitos) moderam o contributo dos motivos para beber (processos explícitos) sobre o padrão de consumo de álcool. Foram incluídos neste estudo 64 participantes com idades compreendidas entre os 18 e os 25 anos de idade. A avaliação do consumo de álcool foi feita através do Teste de Identificação dos Transtornos do Uso de Álcool (AUDIT). A variável, motivos para beber foi avaliada através do instrumento Drinking Motives Questionnarie – Revised (DMQ-R), e a variável associações implícitas através do Teste de Associação Implícita – Identidade Álcool (TAI-IA). Tanto os processos implícitos como os explícitos contribuíram para o consumo de álcool. As associações implícitas moderam a influência dos motivos para beber no consumo de álcool; quando os sujeitos apresentam níveis elevados de associação implícita favoráveis ao álcool, mas motivos (sociais, coping e de conformidade) para beber correspondem a maiores consumos de álcool. Deste modo, mesmo em populações com baixos níveis de consumo, conclui-se que os processos implícitos e os explícitos contribuem para o consumo de álcool, podendo existir uma interação entre estes dois processos.
- Biodistribution analysis of striatal and cerebellar administration of modified adeno-associated viral vectors in normal micePublication . Afonso, Inês Torquato; Nobre, Rui Jorge; Nóbrega, ClévioOs vírus adeno-associados (AAV) têm 25 nm de diâmetro e transportam uma molécula de DNA de cadeia simples. O seu genoma está flanqueado por duas repetições terminais invertidas e codifica para proteínas de replicação, proteínas da cápside e para a proteína AAP. É um vírus cuja replicação depende da co-infeção com outro vírus, como por exemplo o adenovírus ou o herpes simplex vírus, pois não possui a capacidade de se replicar por si só. Até hoje foram descritos 13 serótipos de AAV e não existe na literatura doenças associadas à sua infeção. Os vetores AAV demonstraram ser sistemas de entrega seguros e fiáveis para entrega de transgenes terapêuticos no sistema nervoso central, mas também noutros órgãos e tecidos. O sistema nervoso central possui um caráter imuno privilegiado, uma vez que, está protegido pelas meninges, pela barreira hemato-encefálica e pelo líquido cefalorraquidiano, que em conjunto previnem a passagem de agentes nocivos exógenos, mas também de agentes terapêuticos. É, portanto, urgente encontrar novos métodos para que o transgene terapêutico atinja as células alvo no tratamento ou na cura de doenças neurológicas. O presente estudo pretende investigar as propriedades do novo vetor mosaico AAV1/AAV2 injetado no estriado e nos núcleos profundos do cerebelo (DCN), comparando-o com os serótipos parentais AAV1 e AAV2. Os critérios avaliados foram a biodistribuição do vetor pelo cérebro, as regiões do cérebro que é capaz de transduzir, o tipo de células que infeta e a toxicidade inerente à sua administração. O novo vetor mosaico AAV1/AAV2 é um AAV recombinante que transporta uma cadeia de DNA simples constituído por as repetições terminais repetidas do serótipo AAV2, o gene que codifica para a proteína green flourescent protein (GFP) e pelo promotor do citomegalovírus. A particularidade que diferencia este vetor dos já existentes, é a constituição da sua cápside, uma vez que a mesma é constituída por proteínas da cápside do serótipo AAV1 e do serótipo AAV2, originando-se por isso uma cápside tipo mosaico, daí o nome, vetor mosaico AAV1/AAV2. Ao possuir estes dois serótipos como constituintes da sua cápside, é possível que o vetor mosaico contenha características das cápside dos vetores parentais tais como, a capacidade de transduzir as células neuronais, característica dos AAV1 e ao mesmo tempo seja capaz de reconhecer o recetor de heparina que é comumente conhecido por ser o recetor primário do AAV2. Este recetor é por isso utilizado para o processo de purificação dos vetores recombinantes do AAV2, através de cromatografia por afinidade à heparina. Desta forma, há a possibilidade do vetor mosaico AAV1/AAV2 poder ser purificado pelo mesmo método. O método da tripla transfecção foi utilizado para a produção dos vetores virais. Este consiste na transfecção de uma linha celular de packaging (HEK293) com três plasmídeos: um plasmídeo helper, um plasmídeo com o transgene de interesse e um plasmídeo que codifica para as proteínas da cápside; que, neste caso específico, são dois plasmídeos, um codificante para as proteínas da cápside do serótipo do AAV1 e outro codificante para as proteínas da cápside do serótipo AAV2. Do mesmo, resulta a produção de um novo vetor com aproximadamente 50% de proteínas da cápside do serótipo AAV1 e os restantes 50% do serótipo AAV2. Numa primeira experiência, murganhos C57BL/6 foram injetados no estriado com 3×109 genomas virais (vg) do vetor mosaico AAV1/AAV2 ou com um dos vetores dos serótipos parentais, AAV1 ou AAV2. Numa segunda experiência, os murganhos foram injetados nos núcleos profundos do cerebelo com 5×109 vg do vetor mosaico AAV1/AAV2 ou com os vetores dos serótipos parentais. Um mês após a injeção, os animais foram sacrificados e o cérebro foi separado, um hemisfério para análise molecular e outro dos hemisférios para análise histológica. Os resultados sugerem que o vetor mosaico AAV1/AAV2 tem uma melhor biodistribuição e transdução comparativamente aos vetores dos serótipos parentais, aquando da sua injeção no estriado. No estriado, os vetores parentais e o vetor mosaico AAV1/AAV2 foram capazes de se espalhar desde a região da injeção para a região mais dorsal do cérebro. No cerebelo os vetores distribuíram-se desde os núcleos profundos do cerebelo para todo o cerebelo, assim como para as regiões que o cerebelo recebe e envia projeções. No estriado, o vetor mosaico AAV1/AAV2 foi o que obteve melhores resultados de transdução e biodistribuição, sendo capaz de transduzir o córtex, o estriado, tálamo, os núcleos endopiriformes, núcleos sub-talâmicos e o globus pallidus; enquanto que, aquando a injecção nos núcleos profundos do cerebelo, o vetor do serótipo AAV1 teve melhor transdução e biodistribuição, sendo capaz de transduzir o cerebelo, o tálamo, o mesencéfalo, o núcleo central da amígdala, a medula e a ponte. Tanto no estriado, como nos núcleos produndos do cerebelo não foi possível inferir o tropismo celular dos vetores parentais e o vetor mosaico AAV1/AAV2, pois nenhum co-localizou com os marcadores utilizados, NeuN, GFAP e Iba-1 que marcam respetivamente, os neurónios, astrócitos e microglia. No entanto, é possível verificar a transdução das células de Purkinje por microscopia, uma vez que, a região onde estas se localizam se encontra a expressar GFP. Os testes toxicológicos revelaram que após a administração dos vetores parentais e o vetor mosaico AAV1/AAV2 no estriado, não houve perda de marcador neuronal. Em conclusão, o vetor mosaico AAV1/AAV2 demonstrou ser um vetor seguro, com resultados que indiciam ser um bom candidato para transdução de células do sistema nervoso central. Este foi capaz de manter o tropismo celular do serótipo parental AAV1 e, simultaneamente, ser purificado pelo método de purificação utilizado para o AAV2, i.e. a cromatografia de afinidade à heparina. Aquando da injeção do vetor mosaico AAV1/AAV2 no cerebelo, a biodistribuição parece estar diminuída em relação ao serótipo AAV1, o que levanta a questão quanto ao contributo do serótipo AAV2 para o modo de dispersão do vetor nesta região. No futuro são necessários testes complementares para determinar se a utilização do vetor mosaico AAV1/AAV2 é superior relativamente aos serótipos parentais e ainda determinar a população neuronal especifica traduzida pelo vetor de interesse. Seria muito interessante que o vetor AAV1/AAV2 fosse empacotado com um gene terapêutico para ser testado, por exemplo, num modelo animal de uma doença neurodegenerativa. Caso os resultados demonstrassem que a utilização do vetor mosaico AAV1/AAV2 fossem vantajosos em relação aos vetores conhecidos, poderia vir a ser utilizado em ensaios clínicos para o tratamento ou cura de doenças neurodegenerativas.