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Estudo do papel biológico das elicitinas de Phytophthora cinnamomi e do seu envolvimento no processo infeccioso
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| 11.56 MB | Adobe PDF |
Authors
Advisor(s)
Abstract(s)
Phytophthora cinnamomi, oomiceta parasita das raízes de Quercus suber, excreta
abundantemente cinamominas, proteínas da família das elicitinas. Foi demonstrada a
interacção destas proteínas com vários tipos de moléculas lipídicas mas desconhece-se o seu
papel biológico.
Neste trabalho foi induzido o silenciamento do gene codificante para a β-cinamomina,
após transformação genética de protoplastos por meios químicos (lipossomas e CaCl2/PEG)
com uma sequência anti-sentido do gene βcin. A selecção dos transformantes foi realizada
através da co-transformação com um gene que conferiu resistência à higromicina B. A
presença dos transgenes foi certificada por PCR. A ausência da proteína em meios de cultura
foi confirmada através de western blotting, aplicando anticorpos monoclonais anti-b-
cinamomina, e a ausência do respectivo RNAm foi comprovada com quantificação por RTPCR
em tempo real, observando-se também uma diminuição na expressão de genes
codificantes para outras elicitinas.
Testes de patogenicidade realizados em Q. suber com o único co-transformante
estável obtido (resistente ao antibiótico e com gene βcin silenciado), com um transformante
simples (resistente ao antibiótico) e com os respectivos isolamentos selvagens revelaram uma
diminuição de patogenicidade na estirpe com o gene βcin silenciado, que não pode ser
atribuída à simples presença do gene de resistência.
Perfis de expressão genética obtidos por cDNA-AFLP revelaram diferenças marcantes
entre co-transformante e isolamento selvagem e a sequenciação de alguns fragmentos
diferencialmente transcritos revelou que estes estão potencialmente associados à expressão do
gene cinβ, destacando-se entre eles um gene associado ao metabolismo de ácidos gordos.
Description
Tese dout., Biologia, Universidade do Algarve, 2006
Keywords
Teses Biologia molecular Parasitas Phytophthora cinnamomi Quercus suber