Loading...
Publication
Catálise de pontes dissulfureto pelas vias enzimáticas que atuam no retículo endoplasmático usando como substrato a proteína fluorescente HyPer
| Name: | Description: | Size: | Format: | |
|---|---|---|---|---|
| 1.91 MB | Adobe PDF |
Advisor(s)
Abstract(s)
O folding oxidativo de proteínas é uma modificação pos-transducional que consiste na formação de pontes dissulfureto intramoleculares pela oxidação de grupos tiol de duas cisteínas. Esta modificação química é essencial para a estabilidade das proteínas, principalmente em proteínas secretadas para o meio extracelular. In vivo, o folding oxidativo de proteínas secretadas pela célula ocorre no retículo endoplasmático e é assistido por uma série de proteínas que atuam como catalisadores. Estas reacções necessitam da presença de um aceitador final de eletrões.
No presente trabalho foram estudadas duas vias enzimáticas que atuam no retículo endoplasmático. Uma via envolve um fluxo de electrões entre duas proteínas, a Endoplasmic Recticulum Oxireductase 1 (Ero1) e a Protein Disulfide Isomerase (PDI); A outra via envolve a PDI e a Peroxiredoxin IV (PRDX4).
O estudo destas vias enzimáticas foi realizado in vitro e avaliado por espectros de fluorescência usando as proteínas fluorescentes Hydrogen Peroxide Sensor (HyPer), e a reduction-oxidation sensitive green fluorescent protein (roGFP) . Analisou-se as velocidades de oxidação da HyPer e roGFP com concentrações diferentes das enzimas envolvidas nas vias de modo a determinar o passo limitante destas reações redox, bem como qual destas duas vias é a mais importante.
O estudo das duas vias possíveis permitiu observar que em todos os casos ocorre oxidação das proteínas fluorescente quando estão presentes todas as enzimas necessárias para a reação ocorrer
Na via da PDI/Ero1 usando HyPer como sensor, a PDI desempenha um papel limitante da velocidade da reação porque a velocidade total de oxidação é mais dependente da concentração de PDI do que da de Ero1.
Description
Dissertação de Mestrado, Engenharia Biológica, Faculdade de Ciências e Tecnologia, Universidade do Algarve, 2016
Keywords
Enzimas Folding Oxidativo de proteínas Hydrogen Peroxide Sensor Reduction-oxidation sensitive Green Fluorescent Protein Protein Disulfide Isomerase Endoplasmic Reticulum Oxiredutase Peroxiredoxins