Estudo do papel desempenhado pela proteína anexina A2 na regulação de vias de transdução de sinal ativadas por Ras

Anastácio, Fábio Miguel Vicente

http://hdl.handle.net/10400.1/7870

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Authors

Anastácio, Fábio Miguel Vicente

Advisor(s)

Madureira, Patricia

Cancela, Leonor

Abstract(s)

As Espécies Reativas de Oxigénio (ERO), têm a capacidade de oxidar o DNA o que leva à ocorrência de mutações génicas, estando o desenvolvimento do cancro intimamente relacionado com os genes que sofrem mutações. O oncogene Ras é um dos genes que se encontra frequentemente mutado no cancro e está associado à sobre produção de ERO pelas vias de transdução de sinal responsáveis pela ativação das NADPH oxidases. A sobre-expressão de Ras induz constitutivamente a expressão de Nox1 que irá produzir o anião superóxido (O2-) que será subsequentemente convertido em peróxido de hidrogénio (H2O2). A anexina A2 é uma proteína antioxidante que interage diretamente com o H2O2 convertendo-o em H2O e O2. Esta proteína está comummente sobre-expressa numa grande variedade de cancros. No entanto, o papel desempenhado pela anexina A2 em células cancerígenas que expressam o oncogene Ras não foi ainda estudado. Neste estudo foram analisadas por western blot vias de sinalização induzidas por Ras e proteínas do sistema antioxidante em duas linhas celulares distintas (MDA-MB 231 e HT1080) com knockdown para a anexina A2 e controlo ambas sem e com sobre-expressão de Ras oncogénico. De seguida foram realizados ensaios com ciclohexamida e actinomicina-D para avaliar se a sobre-expressão do oncogene Ras e o knockdown de anexina A2 teriam efeito sobre a estabilidade proteica e mRNA, respectivamente. Por fim as linhas celulares foram submetidas a ensaios de viabilidade (MTT) e à medição de ERO (DCF-DA). Os resultados demonstraram um aumento na expressão da via de sinalização PI3-K/Akt e da proteína do sistema antioxidante peroxirredoxina II em células knockdown para a anexina A2 e a sobre-expressar Ras comparativamente com as células controlo. A análise da estabilidade proteica demonstrou uma maior estabilização da proteína peroxirredoxina II e Ras em células com depleção de anexina A2. Os ensaios de viabilidade celular e medição de ERO demonstraram um maior número de células e uma maior produção de ERO em células a sobre-expressar Ras, respetivamente.