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Deteção de proteínas virais com nanossensores óticos
| dc.contributor.advisor | Ferreira, Guilherme Nuno de Passos Matos | |
| dc.contributor.author | Águas, Ana Catarina Pina | |
| dc.date.accessioned | 2015-04-29T17:21:47Z | |
| dc.date.available | 2016-04-29T00:30:11Z | |
| dc.date.issued | 2012 | |
| dc.date.submitted | 2012 | |
| dc.description.abstract | O desenvolvimento de tecnologias para a deteção de vírus é um tema de grande interesse em medicina de diagnóstico. Neste contexto, os biossensores têm-se revelado importantes ferramentas bioanalíticas, na medida em que permitem efetuar deteções moleculares de forma rápida, específica, reprodutível e com baixo custo associado. No âmbito desta dissertação, estabeleceram-se metodologias para a deteção fluorescente do fator de infetividade viral (Vif) do VIH através de um nanossensor ótico funcionalizado com anticorpos recombinantes anti-Vif, fragmentos variáveis de cadeia simples 4BL. Quantum dots carboxílicos conjugados a proteínas Vif são excitados a um comprimento de onda de 405 nm, transmitindo luz fluorescente a 605 nm a um fotodetetor de silício amorfo hidrogenado com um filtro de fluorescência integrado. Para implementar um sistema de deteção sensível e eficiente, estudaram-se estratégias de ativação de superfície em chips de vidro. A variabilidade das condições experimentais de um protocolo de silanização com (3-mercaptopropil)-trimetoxisilano (MPTS) foi avaliada através da análise de ângulos de contacto e densidades moleculares de fluoresceína funcionalizada com maleimida. Estabeleceu-se que, uma incubação dos substratos por 4 h com 5% (w/v) MPTS, seguida de cura a 110 ºC por 2 h, e redução com 10 mM ditiotreitol por 30 min, promove a formação de camadas de organosilanos de qualidade com grupos tiol reativos bem orientados. Estratégias de imobilização do elemento recetor foram testadas em substratos de vidro ativados e em sistemas de microfluídica vidro/PDMS, tomando por base o tag de afinidade, glutationa S-transferase (GST), do anticorpo recombinante. Vidros funcionalizados com glutationa e anti-GST mostraram-se igualmente reativos ao anticorpo GST-4BL, resultando uma capacidade de ligação do antigénio de aproximadamente 4.76 x 1010 moléculas/cm2 de QD-Vif, o que corresponde a 15% da cobertura máxima de superfície. Dos ensaios em sistemas de microfluídica resultaram sinais fracos e poucos reprodutíveis, destacando a necessidade de desenvolver metodologias de funcionalização mais apropriadas. | por |
| dc.identifier.uri | http://hdl.handle.net/10400.1/5976 | |
| dc.language.iso | por | por |
| dc.rights.uri | http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/ | |
| dc.subject | Engenharia biológica | por |
| dc.subject | Diagnóstico | por |
| dc.subject | Anticorpos | por |
| dc.subject | Vírus | por |
| dc.subject | Imobilização | por |
| dc.title | Deteção de proteínas virais com nanossensores óticos | por |
| dc.type | master thesis | |
| dspace.entity.type | Publication | |
| person.familyName | Águas | |
| person.givenName | Ana | |
| person.identifier.orcid | 0000-0002-1575-6367 | |
| rcaap.rights | openAccess | por |
| rcaap.type | masterThesis | por |
| relation.isAuthorOfPublication | 23a1460a-af80-48b4-9699-e75fbe2f5a07 | |
| relation.isAuthorOfPublication.latestForDiscovery | 23a1460a-af80-48b4-9699-e75fbe2f5a07 | |
| thesis.degree.discipline | Engenharia Biológica | por |
| thesis.degree.grantor | Universidade do Algarve. Faculdade de Ciências e Tecnologia | pt_PT |
| thesis.degree.level | Mestre | por |
| thesis.degree.name | Mestrado em Engenharia Biológica | por |
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