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- Análises clínicas associadas a anemiaPublication . Fidalgo, Ana; Aureliano, M.; Silva, Henrique dos SantosA anemia é uma doença causada pela diminuição de hemoglobina no organismo . A hemoglobina é uma proteína localizada dentro dos glóbulos vermelhos, que possui o ferro responsável por levar o oxigénio aos tecidos. Existem vários tipos de anemia, causados por uma enorme variedade de factores. À diminuição da hemoglobina estão acopladas características morfológicas dos glóbulos vermelhos que ajudam a distinguir os vários tipos de anemia. Outras características celulares para além destas, bem como dados bioquímicos, auxiliam a divisão de cada tipo de anemia nos seus subtipos Neste trabalho procedeu-se à quantificação automática de parâmetros hematológicos e bioquimicos em 99 pacientes (59 mulheres e 40 homens), com idade média de 57± 25 anos e fez-se o diagnóstico dos tipos e subtipos de anemia presentes nesta população.. A média da concentração de hemoglobina destes pacientes, teve um valor mais baixo nos homens do que nas mulheres representando anemias maioritariamente leves nas mulheres e moderadas nos homens. A população é essencialmente caracterizada por anemia microcitica-hipocrómica. Neste grupo verificou-se que a maioria da população era portadora de uma concentração de ferro e de ferritina diminuídas, sugerindo que a maioria dos pacientes deste grupo sofram de anemia ferropénica. No grupo de anemias normocitico-normocrómicas foi mais abundante a anemia ferropénica nas mulheres e as anemias de doenças crónicas nos homens. As anemias macrociticas foram bastante raras. A população é então maioritariamente composta por anemias ferropénicas (49,5% dos pacientes), onde se obteve concentrações de ferro e ferritina mais baixos, 19,79 ± 7,64 µg/dl e 6,75 ± 3,48 µg/dl respectivamente, talassémias em 16,2% dos pacientes e doenças crónicas (12,1% dos pacientes), onde a ferritina apresentou valores mais elevados ( 413,14 ± 218,99 µg/dl).
- Animais filtradores marinhos da área de influência da pluma estuarina do Rio CávadoPublication . Pereira, TâniaAs águas do rio e do mar apresentam diferentes densidades, o que leva a que o contacto entre estas não resulte na sua mistura imediata, originando uma pluma superficial. Esta dissemelhança é causada pelas diferenças de temperatura, maior no rio, e de salinidade, maior no mar. A extensão imprescindível à mistura das águas de diferentes origens relaciona-se não só com o caudal do rio mas também com a circulação marinha, processos hidrológicos, condições e época do ano. As plumas fluviais de superfície (surface trapped river plumes) são importantes vias de entrada de materiais dissolvidos ou particulados, tais como nutrientes, sedimentos e poluentes de proveniência continental, bem como de uma mais ou menos significativa entrada de água doce no oceano. Estas condições influenciam directamente a biogeoquímica, a sedimentação, os padrões de poluição e a circulação das águas costeiras (Warrick et al, 2004). Esta entrada de materiais continentais varia não só com a corrente do rio, a qual é influenciada por acontecimentos climáticos que afectam a bacia de drenagem, mas também por influencias antropogénicas, tais como o incremento da concentração de nutrientes que se verificou durante as ultimas décadas nos rios Europeus, como resultado do aumento da utilização de compostos de N e P na agricultura (Salen-Picard et al, 2003).
- Applications of polyoxometalates in medicine and their putative mechanisms of actionPublication . Authier, Tatiana; Aureliano, M.Polyoxometalates (POMs) are inorganic metal-oxide assemblies presenting a wide range of possible structure, size and metal-combination, as well as a high solubility in water and large redox chemistry. These properties are of a great interest in medicine and polyoxometalates are investigated to produce inorganic-drugs against virus, bacteria and tumour cells. Results showed that POMs, such as the PM-8 ([NH3Pr]6[Mo7O24]•3H2O) induced inhibition of tumour cell proliferation, whereas others POMs inhibit DNA- or RNA-virus activation or bacterial growth. While the mechanisms of action of the anti-viral and –bacterial activities are quite well understood, the same does not go for the anti-tumour activity. Nevertheless, the inhibition of tumour proliferation seems to be correlated with the inhibition of certain enzymes such as histone deacetylases and ecto-nucleotidases, or with the programmed death, apoptosis. In this report, these several hypothesis were approach, in a way to explain the anti-tumour, -bacterial and -viral activities of some polyoxometales, but nothing as yet been concluded and further studies are needed for a better understading.
- Aspectos da variabilidade na abundância de juvenis de Mero (Epinephelus marginatus) (Lowe, 1834) (Pisces, Serranidae) na Costa Sul da Ilha Terceira, AçoresPublication . Sousa, Inês IsabelOs juvenis de Epinephelus marginatus são considerados como muito associados às zonas costeiras, o que lhes confere vulnerabilidade. Os objectivos do presente estudo são, nomeadamente, a obtenção de dados preliminares sobre o estado da população de juvenis da espécie na costa sul da Ilha Terceira nos Açores e o estudo paralelo da variabilidade da abundância associada a diferentes condições ambientais, em termos abióticos e em termos de composição específica da comunidade. O procedimento adoptado envolveu a aplicação do método de censos visuais em transectos. Na zona de costa exposta, não se verificou a presença dos juvenis da espécie. Nas baías, a densidade de meros juvenis estimada leva a considerar que há ocorrência de um saudável recrutamento para o manancial da área. As variações de abundância mostraram-se associadas ao grau de protecção das forças hidrodinâmicas proporcionado em cada local. Revelou-se também a preferência dos indivíduos por substratos complexos com disponibilidade de abrigos de tamanho adequado, com presença de pedregulhos irregulares médios e pequenos. A degradação do estado do mar parece levar os indivíduos ao abandono das zonas de baixa profundidade amostradas. As similaridades de Bray-Curtis da espécie com as restantes observadas revelaram-se baixas. Um dos aspectos comportamentais observados nos juvenis foi a tolerância da espécie na compartilha do abrigo com outros predadores crípticos e com conspecíficos.
- ATPases do tipo P como alvos terapêuticosPublication . Brás, Pedro; Aureliano, M.As ATPases do tipo P ou P-ATPases são enzimas transmembranares que controlam o fluxo de iões, tais como, K+, Na+, H+, Ca2+, em diferentes células e organelos celulares. Esses iões desempenham um papel fundamental no controlo da homeostasia e dos gradientes electroquímicos nas células. Devido a esse seu papel importante as ATPases têm sido alvos de estudo nestas últimas décadas. A sua modulação por inibidores é promissora para o tratamento de doenças, tais como, cancro da próstata, isquemia do coração e doenças gástricas. De 18 principais inibidores das bombas Na+/K+; K+/H+ e Ca2+-ATPase são conhecidos os mecanismos de acção de 10 (palitoxina, omeprazol, PCAB, ácido scopadulcico B, tapsigargina, ácido ciclopiazónico, curcumina, 2,5-(t-butil)-dihidroxibenzeno, ouabaína e vanádio). Para os outros apenas se sabe que inibem ou que se ligam a determinada região mas as alterações conformacionais que promovem continuam incertas. Com a utilização da cristalografia de raio x e de estudos de mutação génica têm sido fabricados inibidores cada vez mais específicos e menos tóxicos para as células. Espera-se que num futuro próximo a utilização de inibidores para ATPases do tipo P seja muito vantajosa para o tratamento de várias patologias.
- O "Conde Claros en hábito de fraile" na tradição oral moderna Portuguesa. Entre a recriação e a memóriaPublication . Boto, Sandra; Ferré, PedroEste estudo procura centrar-se nalgumas das inúmeras questões que se encontram por responder relativamente ao romance "Conde Claros en hábito de fraile", em particular no âmbito da tradição oral moderna Portuguesa, aventando propostas de resolução. O objectivo é esclarecer, tanto quanto possível, aspectos que têm levado a crítica a olhar para este romance enquanto sinónimo de "texto-enigma".
- Efeito de peroxinitrito nos resíduos de actinaPublication . Silva, Dorinda; Aureliano, M.Sabe-se que várias patologias estão associadas à existência de dano oxidativo nos tecidos. O peroxinitrito (ONOO-) é um dos agentes oxidantes referido em várias patologias, tais como na disfunção ventricular, na carcinogénese e em doenças neurodegenerativas. Para além destes estudos, verificou-se recentemente que a exposição dos filamentos de actina (F-actina) a fluxos submicramolares de peroxinitrito, provoca uma despolimerização destes filamentos com uma consequentemente inibição da estimulação da actividade ATPásica da miosina. No presente trabalho, estudou-se a susceptibilidade da actina, de músculo esquelético de coelho, à exposição crónica in vitro a peroxinitrito, resultante da decomposição do composto SIN-1. O SIN-1 liberta pulsos lentos das espécies oxidantes de superóxido (●O2-) e óxido nítrico (●NO), que reagem entre si resultando em peroxinitrito (ONOO-). O efeito deste agente oxidante na actina foi analisado medindo a capacidade de polimerização da proteína, a nitração dos resíduos de tirosina e a oxidação dos resíduos de cisteína e de metionina. Após exposição ao SIN-1 observou-se, que o peroxinitrito aumenta o tempo de meia vida (t1/2) da polimerização máxima de G-actina com um IC50 de 58,5 ± 10,4 µM SIN-1. Verificou-se oxidação de císteinas de G-actina, sendo a Cys374 a mais susceptível ao ONOO- (IC50 = 10,9 ± 2,5 µM SIN-1). Identificou-se ainda uma possível oxidação das metioninas nas posições 44 e 47 com valores de IC50 de 58,7 ± 19,2 μM e 30,8 ± 8,8 μM de SIN-1, respectivamente. Não se detectou, no entanto, formação de 3-nitrotirosinas. Apesar da oxidação da Cys374 preceder a oxidação da Met44 e da Met47, os valores de IC50 semelhantes encontrados para a inibição da polimerização da G-actina e para oxidação das metioninas, sugerem que estes resíduos apresentam um papel relevante na oxidação induzida pelo peroxinitrito na actina.
- Efeitos in vivo de oligómeros de vanadato em marcadores de stresse oxidativoPublication . Gândara, Ricardo M. C.; Aureliano, M.Nowadays it is accepted that disturbances in transition metals homeostasis are related to changes in the oxidative status, depleting antioxidant substances and/or raising prooxidant ones or altering the activities of key enzymes in the antioxidant defence. Vanadium is probably involved in such effects. However when its toxicity is studied it is normally misregarded the formation of different vanadate oligomers with different structures, chemical properties and biochemical effects. Liver is one of the organs affected by transition-metals toxicity due to its accumulation. This work’s goal was to seek evidences that show different effects promoted by different vanadate oligomers. We have monitored several markers of oxidative stress by using fluorometric and spectroscopic techniques, and we analysed the in vivo effect of an acute exposure (12, 24 hours and 7 days), to a sub-lethal concentration (5 mM; 1 mg/kg) of two vanadium solutions (metavanadate and decavanadate), on hepatic tissue of Halobatrachus didactylus (toadfish). We observed that decavanadate promote different effects than metavanadate in several parameters, namely catalase activity, glutathione content, lipid peroxidation, mitochondrial superoxide anion production and vanadium accumulation. The results show that under defined experimental conditions, both solutions seem to equally depress ROS production as well as total intracellular reducing power.
- Effect of cisplatin in Mytilus galloprovincialis and of cyclophosphamide, tamoxifen and cisplatin on Ca2+ATPasePublication . Morais, Matilde; Aureliano, M.; Bebianno, Maria JoãoIn the last decade anti-cancer drugs, such as cisplatin, tamoxifen and cyclophosphamide, have seen their use greatly increase. Cisplatin is one of the most common anti-cancer drugs used in the EU which ubiquitous occurrence in surface waters, like rivers and estuaries, is related to the poor removal capacities of waste-water treatment plants (WWTPs). These drugs are genotoxic, cytotoxic, mutagenic and teratogenic. Therefore, this study includes a multibiomarker response analysis on mussel Mytilus galloprovincialis during two weeks of exposure to 100ng/l of cisplatin assessing antioxidant enzyme activity - catalase (CAT), glutathion-S-transferase (GST); lipid peroxidation (LPO) coupled with an enzyme assay to determine the inhibition effect of cisplatin, tamoxifen and cyclophosphamide (IC50) in the Ca2+ -ATPase. Results show that cisplatin does not seem to have an effect in the activity of CAT, GST and LPO and that its IC50 is 13.7 mM. The effect of the other two anti-cancer drugs were tamoxifen 0.271 mM and cyclophosphamide 1.134 μM. which makes Cisplatin much less dangerous than the other two anti-cancer drugs.
- Estabelecimento de modelos celulares de Síndrome de Down: uma nova ferramenta para o estudo do desenvolvimento neuronalPublication . Ventura, Igor; Araújo, Inês; Simão, SóniaA síndrome de Down (DS) é comumente causada pela trissomia do cromossoma 21, e caracteriza-se por deficit cognitivo, alterações na morfologia craniofacial e várias comorbilidades. Desequilíbrios na sinalização neurogénica durante períodos críticos da neurogénese são capazes de afetar a proliferação, migração e diferenciação das células estaminais neuronais, causando microcefalia e perturbação do desenvolvimento cerebral, responsáveis pelo deficit cognitivo. Assim, é de extrema importância compreender como o desenvolvimento cerebral é afetado na DS. Para tal, é necessário desenvolver ferramentas celulares que nos permitam estudar em detalhe o neurodesenvolvimento em células humanas. Deste modo, neste projeto pretendeu-se estabelecer e caracterizar linhas de células estaminais pluripotentes induzidas (iPSCs) obtidas a partir de fibroblastos da pele de pacientes com trissomia 21 (AG06922) reprogramadas com os factores de transcrição de Yamanaka. Para a caracterização da linha, foram utilizados os critérios propostos pela Sociedade internacional de investigação em células estaminais (ISSCR). Dentro dos quais inclui imunocitoquímica, citometria de fluxo, análise da fosfatase alcalina, deteção viral por PCR, capacidade de diferenciação nas 3 camadas germinativas, entre outros. Com a realização deste trabalho foi possível estabelecer com sucesso a linha iPSC proveniente de um paciente com DS. Esta ferramenta celular irá permitir de futuro estudar a diferenciação neuronal e avaliar vias de sinalização que possam estar alteradas nesta patologia.
- Estudo da dieta em coleções paleoantropológicasPublication . Afonso, Ricardo Manuel Rafael; Bicho, Nuno Gonçalo Viana Pereira Ferreira; Aureliano, M.Existem dois grupos dietéticos dos humanos com 20000 e 4000 anos, um com consumo mais elevado em proteína e o outro com uma importante dieta em fibra. A contribuição do consumo de peixe e outros animais marinhos, para os valores proteicos obtidos nos dois grupos, não foi exactamente conseguida, apesar de parecer indicar que o grupo com 4000 anos apresentava uma dieta mais rica neste tipo de alimentos, não querendo dizer com isto que o grupo com 20000 anos não utilizasse também este tipo de alimentos na sua dieta. É bom referir que com este estudo apenas consigo fazer uma comparação da dieta entre estes dois grupos humanos, não se consegue exactamente quantificar os alimentos ingeridos. Dos elementos estudados, os que apresentaram ser mais úteis foram o bário, zinco, cobre e o cálcio. Os outros elementos, de acordo com outros estudos, devido ao grau de diagénese não foram parecem muito importantes no estudo da dieta por este método. O número de amostras que foi possível usar neste estudo, foi relativamente baixo, tornando mais difícil a interpretação dos resultados. Outro aspecto que não foi favorável, foi o de não possuir nenhuma amostra de carnívoros. O conjunto de técnicas utilizadas ao longo deste estudo, revelaram-se úteis e adquadas, destacando-se a espectroscopia de absorção atómica pela sua sensibilidade e elevado número de elementos que pode quantificar eficazmente. Para um estudo mais aprofundado da dieta do homem do sítio Paleolítico Lapa do Picareiro, seria importante proceder ao estudo do elemento estrôncio, na medida em que talvez com os valores de bário/estrôncio, o estudo da dieta de animais marinhos ficaria mais esclarecida. Métodos complementares seriam importantes no estudo da dieta, como a analise da estriação dentária e uma análise de isótopos entre outros.
- Estudo da interacção do decavanadato com bicamadas lipídicasPublication . Trindade, Marlene; Aureliano, M.; Martins, JorgeO vanádio é um metal de transição de grande interesse nas áreas da química, bioquímica, bem como das ciências da vida e da saúde, em consequência de se terem descoberto acções benéficas dos compostos contendo vanádio, com acção anti-diabética e anti-cancerígena, a realçar de entre outros efeitos farmacológicos. A espécie decamérica do vanádio, também designada decavanadato, tem sido alvo de muitos estudos no desenvolvimento de fármacos no combate dessas doenças. Porém, tendo em conta que o decavanadato é uma espécie bastante estável a pH ácido e estruturalmente compacta, tem gerado alguma controvérsia sobre o modo como este actua ou interage com as membranas biológicas. Por conseguinte, a elucidação da interacção do oligómero decamérico de vanádio com modelos de membranas biológicas, reveste-se de importância acrescida para a compreensão dos mecanismos subjacentes às acções como anti-diabéticos ou anti-cancerígenos. Os lipossomas são o sistema de membrana que melhor simula os estudos envolvendo membranas biológicas. Tendo em atenção a sua dimensão, as vesículas unilamelares grandes (LUV – large unilamelar vesicles), são os mais indicados para efectuar este estudo. Sendo assim, o objectivo deste trabalho experimental, foi o de verificar se o decavanadato interage com bicamadas lipídicas unilamelares. Determinou-se o tempo de desoligomerização do decavanadato em água, de modo a estabelecer a escala temporal possível para os estudos de interacção. Verificouse que o decavanadato é mais estável quanto mais baixo for o pH e a temperatura, e quanto maior for a concentração de vanádio em solução. A partir dos resultados obtidos é possível verificar que a 25ºC, o decavanadato (1mM) a pH 5.84, o valor médio para o tempo de meia-vida é de 22h45±1h45, enquanto a pH 7.53 o tempo de meia-vida médio é somente de 7h30±1h30. Para se poder verificar se o decavanadato interage com bicamadas lipídicas, é necessário utilizar uma sonda de fluorescência que o decavanadato consiga quenchar, neste caso será o 7-nitrobenz-2-oxa-1,3-diazole-4-yl (NBD). Verificou-se então que a constante de quenching do NBD pelo decavanadato em água é 1,677×1012 M−1s−1. Em seguida inseriu-se a sonda lipídica em LUV e observou-se que, também neste caso, o decavanadato é capaz de quenchar a sonda NBD, sendo a constante de quenching 7,20×1010 M−1s−1. Desta forma, a ocorrência de quenching comprova que o decavanadato interage com bicamadas lipídicas zwiteriónicas.
- Estudo da reversão das alteracções funcionais da actina após processo de oxidação/reduçãoPublication . Santos, André Gonçalo Antunes dos; Aureliano, M.; Tiago, TeresaA actina é uma das proteínas mais susceptíveis à oxidação através de espécies reactivas de oxigénio (ROS) e de espécies reactivas de nitrogénio (RNS). Uma da espécie que oxida a actina é o peroxinitrito (ONOO-), provocando oxidação das cisteínas e das metioninas.
- Interacção de oligómeros de vanadato com miosina de músculo esqueléticoPublication . Tiago, Teresa; Aureliano, M.Grande parte da importância biológica que se atribui ao vanádio, está associada à sua forma pentavalente (vanadato), que por virtude de ser um análogo estrutural do ortofosfato, tem efeitos inibitórios, estimulatórios e regulatórios em processos bioquímicos que, em muitos casos se devem à formação de complexos enzima-vanadato via substrato. Um exemplo disso, é o da inibição da actividade ATPásica da miosina pelo vanadato, a qual se deve à formação de um complexo ternário estável M-ADP-Vi no sítio activo da proteína. Contudo, nas soluções de vanádio (+5), Vi pode coexistir em equilíbrio com diferentes espécies oligoméricas (i =1 - 10), tais como a monomérica (V1), dimérica (V2), tetramérica (V4) e decamérica (V10). Por este motivo, a contribuição de diferentes espécies oligoméricas de vanadato na inibição da actividade ATPásica da miosina foi estudada, combinando-se estudos de cinética enzimática com espectroscopia de 51V-RMN. Os estudos cinéticos indicaram que a solução de “decavanadato” contendo essencialmente duas espécies de vanadato, V1 e V10, tem um poder inibitório muito superior à solução de “metavanadato” contendo uma mistura de pelo menos quatro espécies de vanadato diferentes (V1, V2, V4 e V5) e ainda que, a inibição da actividade ATPásica da miosina pelas espécies oligoméricas V4 e V10 é diminuída na presença de ATP. Para além disso, os estudos espectroscópicos por 51V-RMN indicaram que V4 exibe uma resposta, em adição ao ATP, oposta e mais profunda relativamente a V1, sugerindo que contrariamente à interacção de V1 com a miosina, a interacção de V4 é desfavorecida na presença de ATP. Conclui-se que para além de V1, também as espécies oligoméricas V4 e V10 interagem com a miosina, contribuindo para a inibição da enzima. Como tal, as diferentes espécies oligoméricas de vanadato são passíveis de serem utilizadas como sondas no estudo da hidrólise do ATP pela proteína envolvida no processo de contracção muscular.
- Interacção do vanádio com a miosina de músculo esquelético de coelhoPublication . Pereira, JoanaA exposição a vanádio conduz a uma diminuição na actividade ATPásica da miosina e provoca a oxidação dos grupos sulfidrilo desta proteína. No entanto, não está integralmente esclarecido quais os efeitos específicos que ocorrem na miosina quando exposta ao vanádio. Nesse sentido, interessou determinar in vitro quais as alterações estruturais, funcionais e moleculares ocorridas no Subfragmento-1 de miosina de músculo esquelético de coelho após a exposição crónica a soluções de metavanadato, decavanadato e vanadilo. Verificou-se que a exposição de S1 (0,05 mg/mL) a decavanadato inibe a sua actividade Mg2+-ATPásica, sendo o valor de IC50 para esta inibição de 26,6 ± 0,7 µM decavanadato. Na presença de actina, o valor de IC50 é de 28 ± 1 µM decavanadato. A perda de funcionalidade proteica poderá dever-se à oxidação de 2 resíduos de Cys de S1 não expostos ao solvente, após exposição a 1000 µM de decavanadato. Verificou-se que as espécies oligoméricas de vanádio com maior afinidade para o S1 são o decavanadato e o tetravanadato. Revelaram-se os possíveis ligandos do vanádio no S1, através de espectroscopia de RPE. Globalmente, os resultados obtidos sugerem um efeito significativo do vanádio, nos estados de oxidação (IV) e (V) na estrutura e função do S1, em concentrações facilmente alcançáveis daquele metal no ambiente terrestre. The exposure to vanadium leads to a decrease of the myosin ATPase activity and provokes the oxidation of its sulfydryl groups. However, the specific effects of vanadium on myosin are not yet fully understood. Consequently, the objectives of the present work were to establish the structural, funtional and molecular changes suffered by rabbit myosin subfragment-1 after cronic exposure to metavanadate, decavanadate and vanadyl solutions. It was verified that the exposure of S1 (0,05 mg/mL) to decavanadate results in the inhibition of its Mg2+-ATPase activity, resulting in the IC50 value 26,6 ± 0,7 µM decavanadate. In the presence of actin, the IC50 value was 28 ± 1 µM decavanadate. It is suggested that the loss of protein function may be due to the oxidation of 2 core cysteine residues, after exposure to 1000 µM decavanadate. It was also observed that the decavanadate and tetravanadate species show the highest affinity for S1. Lastly, the possible S1 ligands to vanadium were revealed, through EPR spectroscopy. Globally, the obtained results point to significant effect of V(V) and V(IV) states on S1 structure and function, for easily reachable environmental vanadium concentrations.
- Mecanismos de ação de suplementos muscularesPublication . Bonato, Emilio; Aureliano, M.A hipertrofia muscular pode ser devida ao aumento da síntese proteica e/ou à redução do catabolismo de proteínas. O aumento da síntese proteica muscular encontrase diretamente relacionado com o balanço proteico, o qual, por sua vez, está relacionado com os suplementos. Os aminoácidos atuam em variados processos da expressão génica, neles incluído o processo de síntese proteica. Um grupo específico dos mesmos, os aminoácidos de cadeia ramificada, apresenta especial relevância. A leucina é um destes aminoácidos, e destaca-se devido à sua capacidade de promover o aumento da velocidade da síntese proteica através de uma cascata de sinalização iniciada na mTOR. Entretanto, o β-hidroxi-β-metilbutirato, um metabolito da leucina, apresenta-se como um possível precursor do colesterol, levando a uma redução da velocidade da degradação proteica após o exercício.
- Mobilização da calmodulina e da neurogranina depende da variação da concentração de cálcioPublication . Cardoso, Matias; Aureliano, M.A calmodulina (CaM) e neurogranina (Ng) são duas proteínas expressas em células nervosas, localizadas maioritariamente no soma e no núcleo em células do hipocampo. Foi detetado que existia uma mobilização da calmodulina e da neurogranina do soma para as dendrites quando era induzido uma variação da concentração de cálcio, pela adição de um agente quelante (EGTA). Sabendo que a concentração intracelular de cálcio é de 100 nM, pela relação da intensidade de fluorescência com a concentração de cálcio, verificou-se que houve uma redução de 40 nM da concentração intracelular de cálcio em cortes tratados com EGTA durante 15 minutos. Estas proteínas são necessárias em grandes quantidades durante a atividade neuronal na zona das dendrites para ativar os enzimas dependentes de cálcio\calmodulina. A CaM regula uma serie de processos biológicos como por exemplo na regulação da ativação das cinases Ca2+/CaM-dependentes e pela sua grande afinidade com o cálcio. Para obter um conhecimento mais avançado sobre a interação destas duas proteínas analisou-se se estas respondem a estímulos de alta frequência de uma forma coordenada. Verificou-se que apos estímulo existia uma mobilização da CaM e da Ng para os dendrites indicando que a CaM e Ng são necessárias na zona dos dendrites durante atividade neuronal. Em estudos em células sem a capacidade de expressar a Ng a CaM não era mobilizada com a mesma eficácia registada em células normais que expressam a Ng. Verificou-se também que a mobilização da CaM também depende da ativação de recetores NMDA já que na presença do inibidor AP5 a mobilização não foi tão eficaz como em condições normais. Concluiu-se que a mobilidade da CaM e da Ng da soma para as dendrites depende da variação da concentração de cálcio e que esta mesma mobilização dá-se também numa situação de estímulo eletrofisiológico.
- Monitorização da actividade bioelectroquímica da bomba de cálcio do retículo sarcoplasmáticoPublication . Guerreiro, Miguel; Aureliano, M.; Gomes, Henrique L.; Cancela, LeonorNeste trabalho foram isoladas vesículas contendo uma proteína, a Ca2+ATPase, a partir do músculo esquelético de Halobatrachus dydactilus. Essas vesículas foram testadas quanto à sua capacidade de ejecção de protões, acoplada à translocação de Ca2+ (que por sua vez está acoplada à hidrólise de ATP), utilizando um novo método mais rápido e mais preciso de monitorização. O novo sistema, acoplado a um computador pessoal correndo um programa específicamente desenvolvido para o efeito (utilizando a linguagem de programação LabVIEW 5.0), permitiu observar a ejecção de protões por estas vesículas, bem como o efeito de um potente inibidor de P-ATPases, o vanádio. Comparando os resultados obtidos com estudos anteriores (Aureliano, M. e Madeira, V.M.C., 1994)[1] utilizando VRS de Oryctolagus cunilicus, foi possível determinar que estas vesículas eram menos eficientes na ejecção de H+ / acumulação de Ca2+ (com um valor médio de 24,2 contra 35 nmol H+.mg proteína-1.min-1, sendo também mais susceptíveis à acção inibitória dos vanadatos. Numa segunda fase, foram estudadas células derivadas de osso de Sparus aurata (linhas celulares Vsa13 e Vsa16), as quais apresentavam um comportamento semelhante às VRS, i. é, acumulavam Ca2+ ejectando protões, como foi verificado neste estudo. Também se verificou existir uma diferença funcional entre as duas linhas, já que as Vsa16 apresentavam uma maior ejecção de H+ / acumulação de Ca2+ face às Vsa13.
- Nitração de tirosinas na miosina: consequências funcionaisPublication . Palma, Pedro; Aureliano, M.Tem sido demonstrado que o biomarcador 3-nitrotirosina (3-NT), frequentemente utilizado na reactividade do peroxinitrito (ONOO-) com as proteínas, aumenta na miosina após fibrilação atrial [Mihm et al, 2001b, 2003; Kooy et al, 1997] e durante o envelhecimento [Kansky et al, 2005a, 2005b; Hong et al, 2007].
- Perfil lipídico em pacientes com acidente vascular agudoPublication . Duarte, Jessica; Aureliano, M.Este projecto teve como objectivo descrever os valores do perfil lipídico, e comparar estes com a gravidade do acidente vascular cerebral (AVC) verificada com base nas incapacidades que o paciente possui. Adicionalmente, conheceu-se o ambiente vivido numa unidade hospitalar, e observou-se os doentes internados no serviço de Neurologia, de modo a verificar o estado inicial do paciente após o AVC, acompanhando as suas dificuldades, incapacidades e o processo de melhoria. O método de estudo teve como base a recolha dos níveis de colesterol total, colesterol LDL, colesterol HDL e triglicéridos, de 37 pacientes que sofreram um AVC agudo, na altura do internamento dos mesmos, entre Janeiro e Junho de 2009. Após efectuar o tratamento estatístico devido, verificou-se que não existe nenhuma diferença significativa entre os níveis de colesterol total, colesterol LDL, colesterol HDL, triglicéridos entre o sexo feminino e masculino. Aparentemente, para o sexo feminino, níveis mais baixos de colesterol HDL traduzem um AVC com um impacto na escala de Rankin mais negativo, e níveis mais altos de colesterol HDL se correlacionam com melhor impacto na escala de Rankin, isto é, maior autonomia ou menos impacto negativo do AVC. No que diz respeito ao valor médio da escala de Rankin, entre o sexo feminino e masculino, não se verificaram diferenças nos pacientes que sofreram um AVC. Relativamente aos factores de risco para o AVC, verificou-se que a sua incidência não mostra relação com o sexo do doente. No que diz respeito aos factores de risco estudados, os pacientes hipertensos possuem uma maior incidência (60%) [8,9]. Verificou-se que a idade média para a ocorrência do AVC para pacientes fumadores foi de 58,57 ± 9,47, valor este inferior à idade média para pacientes sem factor de risco, hipertensos, diabéticos e obesos (70,22 ± 11,94; 68,77 ± 9,61; 67,33 ± 4,41; 73,50 ± 4,95, respectivamente). Relativamente ao perfil lipídico, os pacientes hipertensos possuem níveis de colesterol total e colesterol LDL superiores aos pacientes obesos (200,82 ± 54,15 mg/dL vs. 169,50 ± 2,12 mg/dL; 130,76 ± 58,00 mg/dL vs. 97,00 ±11,31 mg/dL, respectivamente). No que diz respeito aos níveis de triglicéridos, os pacientes hipertensos possuem níveis inferiores aos diabéticos (133,27 ± 58,53 mg/dL vs. 186,40 ± 87,87 mg/dL, respectivamente). Para os valores da escala de Rankin, os pacientes obesos possuem valores superiores aos pacientes sem factores de risco, hipertensos e fumadores (4,50 ± 0,71 vs. 1,78 ± 2,28; 2,09 ± 1,69; 2,14 ± 1,68, respectivamente). Estes pacientes possuem incapacidades severas onde o paciente requer assistência constante. Verificou-se ainda, que mesmo em lesões pouco extensas, os resultados podem ser drásticos na capacidade de autonomia do paciente, podendo mesmo ficar severamente incapacitado e totalmente dependente de outrem. Conclui-se que não existem variações significativas entre o perfil lipídico e a gravidade do AVC entre o sexo feminino e masculino, e que a única correlação verificada foi relativamente ao sexo feminino, onde níveis mais baixos de colesterol HDL traduzem um AVC com sintomas mais graves.